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Kruppel-like factor（KLF）5は上皮細胞の分化抑制に重要な転写因子であり、上皮性悪性腫瘍で過剰に発現する。口腔癌細胞にKLF5を過剰発現させると細胞の分化形質が阻害されることから、KLF5は癌細胞を脱分化させ、癌進行における重要な因子であると考えられる。本研究では、癌の悪性形質獲得に関わるKLF5遺伝子の抑制的な発現制御機構に着目し、「①KLF5遺伝子の発現抑制機構」と、「②癌細胞分化とKLF5の発現制御との関係性」の２点を明確にしたい。
これまでに申請者はヒトKLF5遺伝子の発現に不可欠な最小必要領域（minimal essential region、MER）とそれに直接関与する転写因子がSp3であることを明らかにした。また、KLF5遺伝子から遠位にあるDNA領域にKLF5発現を抑制するサイレンサー領域が存在し、そこへのCREBの結合がKLF5遺伝子の発現抑制に重要であるデータを得た。そこで、①、②を解明するために以下の通りに研究を進め、結果を得た。
①MER-サイレンサー領域間のインタラクトを解析するためにChromosome conformation capture（3C）アッセイを行ったところ、MERとサイレンサー領域はインタラクトしており、さらに、3C on ChIPアッセイによってMER-サイレンサー領域間にはCREBが介在することが明らかになった。しかしながら、Sp3の介在は検出されなかった。
②細胞を分化もしくは脱分化誘導させ、内在性KLF5、分化マーカー、脱分化マーカーの発現をそれぞれ解析することで、KLF5遺伝子の発現と細胞分化との関係性を明らかにする。そのためのCa(-)培地、Ca(+)培地を用いての細胞分化・分化誘導条件を決定した。
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