| 研究課題/領域番号 |
21K17219
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| 研究機関 | 朝日大学 |
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研究代表者 |
長瀬 春奈 朝日大学, 歯学部, 助教 (40888799)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 唾液分泌不全 / 外分泌 / RNA-Seq / AQP5 / 低分子量Gタンパク質Cdc42 |
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| 研究実績の概要 |
網羅的遺伝子発現解析（RNA-Seq）により遺伝子操作前後の唾液腺と涙腺を比較するため、臓器が萎縮し分泌の差が認められる条件を検討した。腺房細胞特異的なCdc42ノックアウト（KO）４週間後の唾液腺および涙腺において、臓器重量の減少と腺房細胞におけるアポトーシス性の細胞死の増加が認められ、腺腔構造は太く膨らみを持つ構造に変化していた。次に、同KO条件でピロカルピン刺激後の唾液および涙液分泌量を比較したところ、唾液分泌量の有意な減少と涙液分泌量の有意な増加が認められた。これらから、Cdc42KO４週間のRNAをRNA-Seqに用いた。検出した遺伝子から水分泌に連動した挙動を示す因子を選出した結果、fold-change(FC)比（Cdc42KO群/対照群）が涙腺で増加し、且つ、耳下腺（漿液性唾液分泌を担う唾液腺）で－２以下に減少する15因子と、反対に涙腺で減少し、且つ、耳下腺で２以上増加する21因子が選出された。これらは、細胞周期、細胞死、細胞骨格形成、神経伝達などに関わる遺伝子や詳しい機能が知られていないlncRNAであった。検出した遺伝子がどのような生物学的機能を持つかを抽出するGO解析を行ったところ、高度に変動する因子として輸送、脂質・糖の代謝に関わる遺伝子が挙がった。中でも三大唾液腺と涙液で分泌変動と正方向の挙動を示した因子に脂質代謝に関わるAwat2と、負方向の挙動を示した因子に脂質代謝・糖代謝・輸送に関わるMup5が選出された。次に、水分泌に重要なAqp5遺伝子は水分泌と一致した方向に変動したため、その性状を評価した。AQP5タンパク質の発現量は耳下腺KO群で減少し、反対に涙腺KO群で増加した。免疫染色により局在解析をした結果、耳下腺では腺房、涙腺では腺房と導管の両方に局在するAQP5は、Cdc42KOの残留した腺房細胞上で増減していることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
教育エフォートの増加と妊娠・産休のために当初の計画より実験時間が十分にとれず、Aqp5以外の因子についての性状解析ができなかったため、「やや遅れている。」とした。
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| 今後の研究の推進方策 |
選出した遺伝子の定量PCRから、KO群-対照群間で有意な差が認められる因子を見出す。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
教育エフォートの増加と妊娠・産休のために当初の計画より実験時間が十分にとれず、研究に遅延が生じたため。また、論文掲載費に間接経費を充てたため直接経費の出費が抑えられた。次年度使用分はデータから抽出した候補因子の性状解析に必要な試薬の購入に使用する予定である。
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