| 研究課題/領域番号 |
21K18658
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
白石 史人 広島大学, 先進理工系科学研究科(理), 准教授 (30626908)
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| 研究分担者 |
富岡 尚敬 国立研究開発法人海洋研究開発機構, 超先鋭研究開発部門(高知コア研究所), 主任研究員 (30335418)
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| 研究期間 (年度) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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| キーワード | 集束イオンビーム加工 / 微生物 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度の検討から，SYBR Green Iが走査型透過X線顕微鏡での検出に適していないことが明らかとなったため，今年度は計画通り，他の標識物質の探索を行った．
まず，以下の20種類の物質で標識されたEUB338のFISHプローブに対し（Cy3-tyramide，Cy3.5，Cy5，BIO，BIOdT，DBCOTEG，AmC12，AmC3，2OMeA，5MedC，BHQ1dT，BHQ2dT，BioON，BioTEG，PHO，AmC6，DeoxyInosine I，DeoxyInosine U，Azido，Alkyne），走査型透過X線顕微鏡によって炭素と窒素のNEXAFSスペクトルを取得した．その結果，Cy3-tyramideの炭素スペクトルには約285.2 eVと約285.8 eVに特徴的なピークが認められた．
そこで，Cy3-tyramideによるCARD-FISHを適用した大腸菌をδ-MnO2と混合し，それらを炭素支持膜付き銅グリッド上に載せて走査型透過X線顕微鏡分析を行った．その結果，蛍光観察でCARD-FISH標識されていることが明らかな大腸菌からは，タンパク質由来の約288.2 eVのピークに加え，約285.2 eVのピークも得られた．このピークはCy3-tyramideのみの場合に比べると小さく，また約285.8 eVのピークは認識できなかったが，CARD-FISH標識されている場所に特異的に分布したことから，Cy3-tyramideに由来するものと思われる．これらのことから，検討した標識物質の中では，Cy3-tyramideが走査型透過X線顕微鏡による検出に最も適していると結論された．
本年度はまた，新手法の潜在的適用対象である様々なマンガン・炭酸塩試料に関しても，予察的検討を開始した．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ほぼ当初の計画通り，網羅的な標識物質の検討を実施し，FIB薄膜でも検出できそうな物質を発見することができた．
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| 今後の研究の推進方策 |
Cy3-tyramideによるCARD-FISHを適用した大腸菌をδ-MnO2と混合し，今度はFIB加工による薄膜を作成，Cy3-tyramideのシグナルをSTXMにより検出する．それが成功すれば，この手法を様々な天然試料に適用する．
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