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2021 年度 実施状況報告書

全可視光を吸収する光合成色素蛋白質の創出

研究課題

研究課題/領域番号 21K19085
研究機関岡山大学

研究代表者

長尾 遼  岡山大学, 異分野基礎科学研究所, 特任講師 (30633961)

研究期間 (年度) 2021-07-09 – 2023-03-31
キーワード光合成 / 植物・藻類 / 集光性色素タンパク質
研究実績の概要

光合成生物は、太陽光エネルギーを捕集するために集光性色素タンパク質(Light-harvesting complex, LHC)を発達させてきた。LHCは光合成生物毎に種類が異なり、結果として見た目の色の違いが生じる。色の要因は可視光を吸収する色素分子にあり、主要色素としてクロロフィル(Chlorophyll, Chl)とカロテノイド(Carotenoid, Car)が存在する。もしLHC内のChlやCarの種類および結合様式を自在に設計することができれば、可視光領域の全波長を吸収するLHCを創ることが可能かもしれない。本研究は、分子設計した褐色LHCを用いてアポタンパク質に対する色素分子の結合選択制およびホロタンパク質の機能を紐解くことにより、吸収波長を変化させた褐色LHCの分子メカニズムを明らかにする。また、褐色LHCの研究を足掛かりとし、広範囲の可視光を捉えることができるLHCの創出を目指す。
当該年度では、大腸菌を用いて発現させた褐色LHCアポタンパク質と色素分子の再構成を実現した。褐色LHCの遺伝子をコードするプラスミドを発現系大腸菌C41(DE3)に形質転換し、IPTGによる発現誘導を行ったところ、封入体への発現を確認した。Chl a, Chl c, fucoxanthin, diadinoxanthinの混合物と共に封入体のリフォールディングを試したところ、立体構造解析によって得られた野生型褐色LHCと同程度の分子量を持つリコンビナント褐色LHCが再現できた。しかし、色素の結合が緩く、条件によっては脱離してしまうことが判明したため、さらなる条件検討が必要であると判明した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

大腸菌を用いて発現させた褐色LHCアポタンパク質と色素分子の再構成によって、LHCホロタンパク質が得られた。従って、当初の計画通り本研究は進行している。しかし、ホロタンパク質の色素結合保持能が低いことが判明した。この点は予期していなかった点であり、次年度に改善が必要な点として挙げられる。
ホロタンパク質の色素保持能の低さが露呈したため、個々のChlやCarの結合親和性を試す研究までは進めることができなかった。この点で本研究計画の一部が遅延している。

今後の研究の推進方策

まずは、LHCホロタンパク質の色素結合保持能を向上させるための条件検討を行う。具体的には、buffer組成、界面活性剤の条件を検討する。次に、ChlやCarの中でどの種類が特異的に結合し、構造安定化に寄与しているか突き止める。最後に、色素結合サイトの周辺に部位特異的変異を挿入し、色素分子の配位子となりえるアミノ酸を同定する。変異体の機能評価により、個々の色素分子の役割を明らかにする。

  • 研究成果

    (5件)

すべて 2022 2021 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (1件) (うち招待講演 1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Excitation-energy transfer in heterocysts isolated from the cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120 as studied by time-resolved fluorescence spectroscopy2022

    • 著者名/発表者名
      Nagao Ryo、Yokono Makio、Ueno Yoshifumi、Nakajima Yoshiki、Suzuki Takehiro、Kato Ka-Ho、Tsuboshita Naoki、Dohmae Naoshi、Shen Jian-Ren、Ehira Shigeki、Akimoto Seiji
    • 雑誌名

      Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics

      巻: 1863 ページ: 148509~148509

    • DOI

      10.1016/j.bbabio.2021.148509

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Structure of a tetrameric photosystem I from a glaucophyte alga Cyanophora paradoxa2022

    • 著者名/発表者名
      Koji Kato、Ryo Nagao、Yoshifumi Ueno、Makio Yokono、Takehiro Suzuki、Tian-Yi Jiang、Naoshi Dohmae、Fusamichi Akita、Seiji Akimoto、Naoyuki Miyazaki、Jian-Ren Shen
    • 雑誌名

      Nature Communications

      巻: 13 ページ: 1679

    • DOI

      10.1038/s41467-022-29303-7

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Molecular phylogeny of fucoxanthin‐chlorophyll <i>a</i> / <i>c</i> proteins from <i>Chaetoceros gracilis</i> and Lhcq/Lhcf diversity2021

    • 著者名/発表者名
      Kumazawa Minoru、Nishide Hiroyo、Nagao Ryo、Inoue‐Kashino Natsuko、Shen Jian‐Ren、Nakano Takeshi、Uchiyama Ikuo、Kashino Yasuhiro、Ifuku Kentaro
    • 雑誌名

      Physiologia Plantarum

      巻: 174 ページ: e13598

    • DOI

      10.1111/ppl.13598

    • 査読あり
  • [学会発表] 珪藻の光化学系光捕集超分子複合体の機能構造解析2022

    • 著者名/発表者名
      長尾遼
    • 学会等名
      第63回日本植物生理学会
    • 招待講演
  • [備考] Ryo NAGAO WEB site

    • URL

      https://ryoagan.wixsite.com/nagaoryo

URL: 

公開日: 2022-12-28  

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