| 研究課題/領域番号 |
21K19262
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
黒木 俊介 大阪大学, 大学院生命機能研究科, 准教授 (50735793)
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| 研究期間 (年度) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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| キーワード | 性決定 |
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| 研究実績の概要 |
転写因子が標的遺伝子を活性化または抑制する際には、各々が標的に応じた適切な結合パートナーと複合体を形成することが重要である。ほ乳類Y染色体上の遺伝子Sryは、雄への分化を誘導する性決定のマスター転写因子である。しかし、1991年にSryが発見されてから約30年が経つにも関わらず、Sryが雄分化を誘導する際の機能的な結合パートナーは未だに同定されていない。本研究では、真の性決定遺伝子Sry-Tと結合するタンパク質をBioID法で同定し、Sry-Tによる性決定の転写制御メカニズムの解明することを目的とする。今年度は、Biotin化酵素AirIDをSry-T遺伝子座にノックインしたマウスを作製した。しかし、このマウスは雄から雌への性転換の表現型を示し、系統を樹立することが出来なかった。そこで、代替案として、Biotin化酵素TurboIDを連結したSry-T (Sry-T-TurboID)またはNLSを付加したTurboID (TurboID-NLS)を強制発現するES細胞株を樹立した。これらの細胞を用いてBioIDによるMS解析で相互作用タンパク質を同定し、Sry-T-TurboIDとTurboID-NLSのスコア比からSry-Tに特異的に相互作用するタンパク質のリストを作成した。得られた遺伝子リストを、申請者が既に取得している胎生11.5日生殖腺の遺伝子発現データと照合し、特に生殖腺に発現するSry-T結合クロマチン因子の候補として2つの遺伝子を特定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初作製を予定していたSry-T-AirIDマウスが予想外に性転換表現型を示したため、このマウス系統の樹立ができなかった。次善策として、ES細胞を用いてSry-Tと相互作用するタンパク質をBioID法で探索する手法に切り替えたことで、当初の実験計画よりも進捗が遅れた。
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| 今後の研究の推進方策 |
Sry-Tと相互作用する可能性のある2つの遺伝子に着目し、これらの欠損マウスを作出し、染色体XYの個体が雌に性転換するか、すなわちSry-Tの雄分化誘導能が阻害されるかを調べる。性転換表現型が観察された場合、胎生11.5日目の生殖線を用いてSry-TのChIP-シーケンスとRNAシーケンスを行い、候補分子のSry-Tのゲノム上の局在や転写制御への寄与を明らかにする。一連の実験を通して、Sry-Tによる性決定の転写制御メカニズムの実体を解明する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度に作製を予定していたSry-T-AirIDマウスが予想外に性転換表現型を示し、マウス系統の樹立ができなかった。その結果、当初の計画よりも購入するするマウス費用と飼育管理費が少なくなり、次年度への使用額が生じた。次年度使用額は、既に得ているSry-T結合タンパク質の候補を欠損するゲノム編集マウスの樹立と飼育に使用する。
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