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本研究課題では、中心体非依存性微小管ネットワークの形成の場を題材に、クライオ電子顕微鏡法による細胞内分子構造解析法の整備を行った。目的タンパク質を蛍光標識したCOS7細胞をグリッド上で培養・急速凍結し、クライオ蛍光顕微鏡で標的分子のグリッド上でのマップを作成、その後、細胞周辺の薄い部分を狙ってクライオ電子線トモグラフィー撮影を行った。得られた画像を3次元再構成し、その解釈は深層学習またはテンプレートマッチングにより自動化に成功した。また、iPS心筋細胞を用いて、核周辺のZ軸方向に5-10μmの厚さのある部分をFIB-SEMにて薄切し、クライオ電子線トモグラフィー法のスキームを一通り確立した。
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