レオウイルスベクターを用いた新規粘膜ワクチンの開発に関する研究

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21K19379
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 小林 剛 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (90324847)
• 研究期間 (年度): 2021-07-09 – 2023-03-31
• キーワード: レオウイルス

研究実績の概要

本研究では、病原性が低く、安全性が高い10分節二本鎖RNAゲノムを有する哺乳類レオウイルス（MRV）を用いて、世界経済に多大な影響を与えている新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）および急性胃腸炎を引き起こすノロウイルスに対する粘膜ワクチンの開発を目的としている。
本年度は、SARS-CoV-2のSタンパク質の受容体結合部位（RBD）を発現する組換えMRV（rMRV-RBD）のin vivoモデルを用いた解析を行った。rMRV-RBDをハムスターに経鼻接種し、その後、野生型SARS-CoV-2を攻撃接種し、体重変化、肺でのウイルス量、中和抗体産生能および病理組織について解析を行った。その結果、コントロール群（PBS接種群、野生型MRV接種群）と比較して、rMRV-RBD接種群の感染防御効果については有意な差を認めることができず、接種方法や組換えMRVベクターの改良等を加えることで免疫反応を増強させる必要があると考えられた。MRVベクターの改良については、S1遺伝子にコードされるセルアタッチメントタンパク質sigma1と直接融合させたRBDを発現する組換えウイルスの作製、解析を行っている。
ノロウイルスVP1タンパク質を発現するMRVについては、S1遺伝子内に2A配列を付加したS2 ORF領域を挿入することで両方のMRVタンパク質を発現する組換えS1遺伝子およびS2遺伝子両末端の間にノロウイルスVP1 Pドメインを挿入した遺伝子を有する組換えウイルスを作出した。さらに、sigma1と直接融合させたVP1 Pドメインを発現する組換えウイルスを作製し、in vitroおよびin vivo解析を進めている。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of Sialic Acid-Independent Simian Rotavirus Mutants in Viral Infection and Pathogenesis (2023)
  • 著者名/発表者名: Yamasaki Moeko、Kanai Yuta、Wakamura Yoshiki、Kotaki Tomohiro、Minami Shohei、Nouda Ryotaro、Nurdin Jeffery A.、Kobayashi Takeshi
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 97 ページ: e01397-22
  • DOI: 10.1128/jvi.01397-22
  • 査読あり
• [雑誌論文] N-Glycosylation of Rotavirus NSP4 Protein Affects Viral Replication and Pathogenesis (2023)
  • 著者名/発表者名: Nurdin Jeffery A.、Kotaki Tomohiro、Kawagishi Takahiro、Sato Shintaro、Yamasaki Moeko、Nouda Ryotaro、Minami Shohei、Kanai Yuta、Kobayashi Takeshi
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 97 ページ: e01861-22
  • DOI: 10.1128/jvi.01861-22
  • 査読あり
• [雑誌論文] A reverse genetics system for human rotavirus G2P[4] (2022)
  • 著者名/発表者名: Hamajima Rina、Lusiany Tina、Minami Shohei、Nouda Ryotaro、Nurdin Jeffery A.、Yamasaki Moeko、Kobayashi Nobumichi、Kanai Yuta、Kobayashi Takeshi
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 103 ページ: 001816
  • DOI: 10.1099/jgv.0.001816
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of an oncolytic mammalian orthoreovirus expressing the near-infrared fluorescent protein iRFP720 (2022)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Katsuhiro、Yamada Kentaro、Etoh Tsuyoshi、Kitagawa Masahiro、Shirasaka Yoshinori、Noguchi Kazuko、Kobayashi Takeshi、Nishizono Akira、Inomata Masafumi
  • 雑誌名: Journal of Virological Methods 巻: 308 ページ: 114574
  • DOI: 10.1016/j.jviromet.2022.114574
  • 査読あり
• [雑誌論文] Emerging norovirus GII.4 Sydney[P31] causing acute gastroenteritis outbreak in children in Japan, during COVID-19, 2021 (2022)
  • 著者名/発表者名: Pham Ngan Thi Kim、Nishimura Shuichi、Shimizu-Onda Yuko、Trinh Quang Duy、Komine-Aizawa Shihoko、Khamrin Pattara、Okitsu Shoko、Sato Shintaro、Kobayashi Takeshi、Maneekarn Niwat、Hayakawa Satoshi、Ushijima Hiroshi
  • 雑誌名: Journal of Infection and Chemotherapy 巻: 28 ページ: 1347-1351
  • DOI: 10.1016/j.jiac.2022.05.015
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The nonstructural p17 protein of a fusogenic bat-borne reovirus regulates viral replication in virus species- and host-specific manners (2022)
  • 著者名/発表者名: Nouda Ryotaro、Kawagishi Takahiro、Kanai Yuta、Shimojima Masayuki、Saijo Masayuki、Matsuura Yoshiharu、Kobayashi Takeshi
  • 雑誌名: PLOS Pathogens 巻: 18 ページ: e1010553
  • DOI: 10.1371/journal.ppat.1010553
  • 査読あり
• [雑誌論文] Whole genome sequencing and evolutionary analysis of G8P [8] rotaviruses emerging in Japan (2022)
  • 著者名/発表者名: Phan Tung、Kobayashi Masaaki、Nagasawa Koo、Hatazawa Riona、Thi Kim Pham Ngan、Miyashita Hideaki、Komoto Satoshi、Tajima Takeshi、Baba Tuneyoshi、Okitsu Shoko、Khamrin Pattara、Maneekarn Niwat、Kimura Hirokazu、Kobayashi Takeshi、Hayakawa Satoshi、Ushijima Hiroshi
  • 雑誌名: VirusDisease 巻: 33 ページ: 215-218
  • DOI: 10.1007/s13337-022-00765-z
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Whole genome sequence of an uncommon G9P[4] species A rotavirus containing DS-1-like (genotype 2) genes in Japan (2022)
  • 著者名/発表者名: Phan Tung、Hatazawa Riona、Komoto Satoshi、Nishimura Shuichi、Khamrin Pattara、Pham Ngan Thi Kim、Okitsu Shoko、Kobayashi Takashi、Maneekarn Niwat、Hayakawa Satoshi、Ushijima Hiroshi
  • 雑誌名: Archives of Virology 巻: 167 ページ: 1603-1606
  • DOI: 10.1007/s00705-022-05462-2
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Whole Genome Characterization of HAstV5-HAstV8-HAstV1 Recombinant Strains of ORF1a-ORF1b-ORF2 Regions (2022)
  • 著者名/発表者名: Pattara Khamrin, Kattareeya Kumthip, Shintaro Sato, Shoko Okitsu, Takeshi Kobayashi, Satoshi Hayakawa, Hiroshi Ushijima, Niwat Maneekarn
  • 学会等名: 第68回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] Recent advances in rotavirus reverse genetics research (2022)
  • 著者名/発表者名: 小林剛
  • 学会等名: 第68回日本ウイルス学会学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] ロタウイルス感染に関与する宿主因子Tumor Associated Calcium Signal Transducer 2の機能解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 山崎萌子、金井祐太、浜島りな、小瀧将裕、南昌平、納田遼太郎、Jeffery A. Nurdin、小林剛
  • 学会等名: 第68回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] ロタウイルスNSP2タンパク質の機能解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 小瀧 将裕、金井 祐太、南 昌平、納田 遼太郎、Jeffery A. Nurdin、山﨑 萌子、小林 剛
  • 学会等名: 第68回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] マウス順化サルロタウイルスの作出 (2022)
  • 著者名/発表者名: 金井 祐太、小瀧 将裕、南 昌平、納田 遼太郎、山﨑 萌子、小林 剛
  • 学会等名: 第68回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] ヒトロタウイルスHN126株におけるリバースジェネティクス系の確立 (2022)
  • 著者名/発表者名: 浜島 りな、Tina Lusiany、南 昌平、納田 遼太郎、Jeffery A. Nurdin、山﨑 萌子、小林 宣道、金井 祐太、小林 剛
  • 学会等名: 第68回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] Single amino acid substitution in VP7 promotes the pathogenicity of simian rotavirus in mice (2022)
  • 著者名/発表者名: Yuta Kanai, Eriko Hirai, Tomohiro Kotaki and Takeshi Kobayashi
  • 学会等名: 14th International dsRNA Virus Symposium
  • 国際学会
• [学会発表] N-glycosylation of rotavirus NSP4 protein affects viral replication and pathogenesis (2022)
  • 著者名/発表者名: Tomohiro Kotaki, Jeffery A. Nurdin, Takahiro Kawagishi, Shintaro Sato, Moeko Yamasaki, Ryotaro Nouda, Shohei Minami, Yuta Kanai, Takeshi Kobayashi
  • 学会等名: 14th International dsRNA Virus Symposium
  • 国際学会
• [学会発表] Analysis of the role of rotavirus NSP4 protein in viral replication and pathogenicity (2022)
  • 著者名/発表者名: Tomohiro Kotaki, Nurdin Jeffery A., Kawagishi Takahiro, Sato Shintaro, Yamasaki Moeko, Nouda Ryotaro, Minami Shohei, Kanai Yuta, Kobayashi Takeshi
  • 学会等名: 第20回 あわじ感染と免疫国際フォーラム
  • 国際学会
• [学会発表] Identification of TACSTD2 as a host factor involved in rotavirus infection (2022)
  • 著者名/発表者名: Moeko Yamasaki, Yuta Kanai, Rina Hamajima, Tomohiro Kotaki, Shohei Minami, Ryotaro Nouda, Takeshi Kobayashi.
  • 学会等名: 第20回 あわじ感染と免疫国際フォーラム
  • 国際学会