研究課題
筋細胞分化の転写因子MEF2Dのexon 3にはα1とα2の2種類があり相互排他的に使い分けられている（MEF2D α1、MEF2D α2 ）。MEF2D α1はHDAC4と結合し分化に抑制的に作用するが、MEF2D α2はASH2Lと結合し分化誘導に働くと考えられている。RNA結合蛋白RBFOX2は、スプライシングにおけるα2 exonの選択を誘導してMEF2D α2を発現させることで、筋芽細胞の分化を促進すると考えられている。MEF2Dはリンパ球分化制御にも働き、一部の急性リンパ性白血病（ALL）では、MEF2D融合遺伝子が認められることが明らかとなった。MEF2D融合タンパクはPAX5の機能を抑制することでリンパ球分化を抑制すると考えられている。本研究では、MEF2D融合遺伝子陽性ALLに対して、MEF2D融合遺伝子のスプライシングにおけるα2エクソンの使用（α2スイッチ）を誘導し、分化誘導型アイソフォームにすることで、MEF2D融合蛋白の分化抑制能を解消する治療法開発を行う。今年度は、Kasumi-7（MEF2D-HNRNPUL1陽性）、KOPN70（MEF2D-BCL9陽性）細胞を用いてRT-PCRを行い、これらの細胞において発現するMEF2D融合遺伝子がα1 exonのみを使用していることを確認した。さらに、ドキシサイクリン誘導性にRBFOX2を発現するレンチウイルスベクターを作製し、これをLCL細胞（不死化B細胞）に安定導入した細胞を作製し、RBFOX2の発現誘導により野生型MEF2D遺伝子にα2スイッチが起こることを確認した。さらにα1あるいはα2エクソンを使用するMEF2D-BCL9（MB α1とMB α2）の発現ベクターを作製し、ルシフェラーぜアッセイを行いPAX5転写活性抑制能を比較したが、意外なことに両者の抑制能には相違がなかった。
2: おおむね順調に進展している
実施を計画していた実験は予定通り実施でき、結果は得られている。得られた結果は予想していたものとは異なるものであったが、その原因究明も含めてさらに検証を進めていく。
今後は、MB α1とMB α2の間でPAX5転写活性抑制能の差が認められなかった理由を明らかにするために、GST-HDAC4、GST-ASH2L（発現ベクター作成済み）を用いてGST-pull down assayによりMB α1とMB α2の間のHDAC4、ASH2Lへの結合親和性の違いを比較する。さらに、作成済みのドキシサイクリン誘導性RBFOX2発現ベクターをKOPN70に導入し、RBFOX2発現誘導によりM-Bにα2スイッチを誘導することができるか、それによりPAX5転写標的遺伝子の発現抑制が解除されるかを検討していく。
コロナウイルス感染蔓延のため予定していた国内学会、海外学会への参加がオンライン参加となり、渡航費がかからなくなったため。これらは次年度に消耗品購入にあてる予定である。
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Proceedings of the National Academy of Sciences
巻: 119 ページ: -
10.1073/pnas.2120787119
Thrombosis Research
巻: 213 ページ: 91～96
10.1016/j.thromres.2022.03.010
Journal of Biological Chemistry
巻: 298 ページ: 101833～101833
10.1016/j.jbc.2022.101833
Blood
巻: 139 ページ: 1850～1862
10.1182/blood.2021011921
https://bloodgene-1340.jimdofree.com
