研究実績の概要 |
2021年度(令和3年度)においては、既に細胞株として市販されている細胞株および当研究室で樹立した細胞株(骨肉腫:KHOS, KTHOS, MG63, SaOS2, LM8 軟部肉腫細胞株:TNMY-1, Nara-H, Nara-F, GBS-1 ユーイング肉腫細胞株:SK-ES-1, RD-ES)を細胞を継代培養し、実験に供するための準備を行った。これらの細胞株をsubconfluentな状態で細胞を回収し、先行研究で報告されているストレス顆粒関連蛋白であるTIA-1 (T-cell-restricted intracellular antigen-1), TIAR (TIA-1-related protein), G3BP1 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 1), G3BP2 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 2) , CAPRIN-1 (Cell Cycle associated protein 1) , USP10 (Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 10)の遺伝子発現を定性的および定量的に評価するため、mRNAの抽出とcDNAライブラリーの作成を行った。
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今後の研究の推進方策 |
2022年度(令和4年度)においては、ストレス顆粒関連蛋白であるTIA-1 (T-cell-restricted intracellular antigen-1), TIAR (TIA-1-related protein), G3BP1 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 1), G3BP2 (RAS GTPase-activating protein-binding protein 2) , CAPRIN-1 (Cell Cycle associated protein 1) , USP10 (Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 10)の遺伝子発現を定性的および定量的に評価する。また、蛋白発現を認めた細胞株においては、培養細胞の免疫組織化学染色を行い、細胞内の蛋白局在を共焦点レーザー顕微鏡にて観察を行う。さらに、低酸素状態(酸素1%および5%)と通常酸素状態(酸素20%)にて培養後、ストレス顆粒関連蛋白の遺伝子発現および蛋白発現を比較する。
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