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Fusobacterium nucleatumは、歯周疾患だけでなく癌との関連も疑われるものの、逆遺伝学的解析手法がまだ十分に確立されていない。F. nucleatumに関する遺伝学的解析手法を確立することができれば、宿主細胞との相互作用をさらに詳細に分析することができるようになり、歯周疾患や腸疾患を含む様々な慢性炎症の病態解明を一気に加速することができると考えられる。そこで本研究ではF. nucleatumに関する遺伝学的解析手法を確立し、宿主細胞との相互作用に基づく感染分子機構を詳細に解明するための研究基盤を創出することを目的とした。
まず、F. nucleatum 病原因子の機能欠失株作製技法の確立をめざし検討を行った。F. nucleatum と同じく口腔内に生息するグラム陰性偏性嫌気性細菌であるP. gingivalisは遺伝子改変プロトコールがすでに確立されているため、同様の手法を用いてF. nucleatumの遺伝子変異体の作製を試みたが、変異体を獲得することはできなかった。本菌はP. gingivalisと違い、相同組換え能が欠如もしくは著しく低いことが示唆された。
F. nucleatum への遺伝子の導入方法、使用機器、導入条件を検討するために、タグおよび薬剤耐性遺伝子を組み込んだプラスミドの遺伝子導入を行い、その発現を定量RT-PCRにて確認した。その結果、エレクトロポレーション法により効率的に遺伝子を菌体内に導入する方法を確立した。
そこから変異株のみを選別取得する方法を確立するべく、選別に用いる薬剤の選択や使用条件についてさらなる検討を進め、F. nucleatumに対する遺伝子改変操作方法の確立を目指した。
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