| 研究課題/領域番号 |
21K20871
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
赤谷 律 神戸大学, 医学研究科, 学術研究員 (30910004)
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| 研究期間 (年度) |
2021-08-30 – 2023-03-31
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| キーワード | 視神経脊髄炎 / 視神経脊髄炎スペクトラム障害 / 制御性B細胞 / プラズマブラスト / 形質芽細胞 / インターロイキン6 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、以下の3つの方法を用いて研究を実施する計画とした。それぞれの計画についての実績は下記のとおりである。
①in vitro培養系を用いて病原性ないし制御性B細胞分化誘導条件を検討する計画については、予備実験でB細胞のPBへの分化誘導系を確立し、抗IL-6受容体抗体の添加によりPBにおける制御性B細胞が誘導できることを確認した。また、RNAシークエンスによる網羅的遺伝子発現解析を行い、免疫制御性の機能を発揮するプラズマブラストのマーカー候補として、CD200分子が浮上し、現在タンパクレベルでのこの分子の機能を検証している。
②アストロサイトとの共培養系を用いてNMOSDにおける中枢神経内のB細胞動態を明らかにする計画については、予備実験としてB細胞とアストロサイトとの共培養系を用いることでアストロサイトがPBの生存を延長することを確認し、アストロサイトとの共培養によってPBのIL-10発現が上昇することが見出せたが、IL-6シグナルの阻害による有意な変化はみられなかった。また、この共培養の系ではB細胞の数が著減する場合があり中枢神経内での病態を明確に反映した所見と言えるかどうかは未だはっきりしていない。
③in vivoモデルを用いた制御性B細胞誘導の鍵となる分子を検証する計画については、最終段階として実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）マウスモデルを用いて候補分子発現細胞の移入実験による機能解析を行い、加えて候補分子のノックアウトマウスを作成しEAEモデルを用いた実証実験に向けた準備を行う予定であるが、未だ実現には至っていない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
①in vitro培養系を用いて病原性ないし制御性B細胞分化誘導条件を検討する計画について、IL-6シグナルを阻害しながらB細胞の分化誘導を行ったのち、RNAシークエンスによる網羅的遺伝子発現解析を行い、免疫制御性の機能を発揮するプラズマブラストのマーカー候補としてCD200分子が浮上し、現在フローサイトメトリー等で同現象が再現できるかの実験に進んでいる。また、CD200R Fcによる刺激実験を計画し、タンパクレベルでのこの分子の機能を検証しておりこちらについては進捗がみられる。
②アストロサイトとの共培養系を用いてNMOSDにおける中枢神経内のB細胞動態を明らかにする計画について、アストロサイトとの共培養によってPBのIL-10発現が上昇することが見出せたが、IL-6シグナルの阻害による有意な変化はみられなかった。また、この共培養の系ではB細胞の数が著減する場合があり中枢神経内での病態を明確に反映した所見と言えるかどうか未だはっきりしないためいったん中断している。
③in vivoモデルを用いた制御性B細胞誘導の鍵となる分子を検証する計画については、実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）マウスモデルを用いて候補分子発現細胞の移入実験による機能解析を行い、加えて候補分子のノックアウトマウスを作成しEAEモデルを用いた実証実験に向けた準備を行う予定であるが、未だ実現には至っていない。
総合的に3つの計画のうち、①については進展あり、②については中断中、③は開始に至っておらず（準備段階）、やや遅れていると判断している。
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| 今後の研究の推進方策 |
本研究で行っている以下の3つの計画について、今後の推進方策は下記のとおりである。
①in vitro培養系を用いて病原性ないし制御性B細胞分化誘導条件を検討する計画については、現在の実験を継続する。
②アストロサイトとの共培養系を用いてNMOSDにおける中枢神経内のB細胞動態を明らかにする計画については、いったん中断したままとする。
③in vivoモデルを用いた制御性B細胞誘導の鍵となる分子を検証する計画については、①での知見についてある程度のめどが付けばin vivoでの実験を開始する方針とする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じた理由は、試薬が研究室共用のものである程度賄うことができ、当初の予想よりも支出が少なくなったためである。使用計画としては、RNAシークエンスのデータ解析のため、モルシス社のソフトウェアであるPartek Flowを使用予定であるが、このライセンス使用料金およびCD200刺激実験、EAE実験のための機器、試薬に使用予定である。
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