| 研究課題/領域番号 |
21KK0124
|
|---|
| 研究機関 | 自治医科大学 |
|---|
研究代表者 |
谷原 史倫 自治医科大学, 医学部, 准教授 (90754680)
|
|---|
| 研究分担者 |
下田 宙 山口大学, 共同獣医学部, 准教授 (40719887)
田中 良法 岡山理科大学, 獣医学部, 助教 (00747933)
音井 威重 徳島大学, バイオイノベーション研究所, 教授 (30311814)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2021-10-07 – 2026-03-31
|
| キーワード | アフリカ豚熱 / ゲノム編集 / CRISPR/Cas9 / ブタ |
|---|
| 研究実績の概要 |
アフリカ豚熱（African Swine Fever: ASF）は家畜豚への驚異的な伝搬力と致死率から世界の養豚業を破壊しうる伝染病であり、現在までワクチンを含む治療法はない。本研究では、ブタの体内に発現させた遺伝子切断酵素Cas9とCas9を標的ゲノム配列に誘導するガイドRNA(gRNA) により侵入してきたウイルスDNAを切断・失活させるという発想のもと、ASFウイルスを標的としたCas9/gRNA発現ブタを作出する。細胞内に発現させたゲノム編集システムにより感染時に侵入してきたASFウイルスDNAを切断し、ASFウイルスの増殖を阻害することで感染防御能を付与する。現在もASFが散発し多数の野生株を保存しているベトナムで２機関と共同研究を行い、ASFウイルス感染抵抗性ブタ系統の作出を試みる。
細胞レベルでの感染実験をベトナムで実施するため、日本国内で初代ブタマクロファージにSV40LT遺伝子とpTERT遺伝子を組み込んだ不死化ブタマクロファージの作製に着手した。40日齢前後の若豚から腎臓を採取し、細胞培養を経てマクロファージを分離した。免疫蛍光染色によりマクロファージであることを確認後、ウイルスベクターを用いてSV40LT遺伝子とpTERT遺伝子を導入、培養を開始した。共同研究実施先のVietnam National University of Agriculture所属の共同研究者とは継続的に打ち合わせを行い、情報共有をしている。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ブタマクロファージの単離とSV40LT遺伝子とpTERT遺伝子の導入による不死化のステップで検討に時間を要し、進捗はやや遅れている。トランスジェニックブタの作出条件の検討（胚での予備検討）、ベトナム研究機関側との調整は完了しており、並行して胚を用いた実験を開始することで後れを取り戻す予定であり、研究に支障はない。
|
| 今後の研究の推進方策 |
研究計画の変更は現時点では無く、トランスジェニックブタの作出にむけた実験を開始する。並行して不死化ブタマクロファージを樹立後は速やかにCRISPR/Cas9システム発現コンストラクトを組み込み、ベトナムで実際に流行しているアフリカ豚熱野外株を用いた感染実験へと展開、研究を推進していく予定である。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
不死化マクロファージ株の樹立に遅れが生じており、ベトナムへの渡航費等で次年度への繰り越しが発生している。次年度使用額も投入して主にベトナムでの研究を推進し、研究に遅延が生じないように留意する。加えて、ベトナムにおいて遺伝子改変ブタを作出する際には受胚豚として多くの成豚が必要となるほか、飼育にかかる諸費が多額になるため、渡航計画に変更が生じた場合にも飼養頭数を増加させて研究のさらなる推進を図るなど、無駄なく予算執行可能な計画としている。
|
