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2012 年度 実績報告書

TDP―43過剰発現による孤発性ALSのサルモデル作製製

研究課題

研究課題/領域番号 22240039
研究機関東京医科歯科大学

研究代表者

横田 隆徳  東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90231688)

研究分担者 内原 俊記  公益財団法人東京都医学総合研究所, 東京都神経科学総合研究所, 副参事研究員 (10223570)
桑原 聡  千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70282481)
木村 展之  独立行政法人医薬基盤研究所, 霊長類医科学研究センター, 研究員 (80392330)
樋口 理  独立行政法人国立病院機構長崎川棚医療センター(臨床研究部), 免疫ゲノム医化学研究室, 室長 (50361720)
研究期間 (年度) 2010-04-01 – 2013-03-31
キーワード筋萎縮性側索硬化症 / 動物モデル / TDP-43 / AAV / 軸索電流 / エクソソーム
研究概要

Flag標識TDP-43とGFPを同時に発現可能なアデノ随伴ウイルスベクター(AAV)を新規に開発してカニクイザル脊髄C6に注入し、TDP-43の拡がりを解析した。局所では注入部位から同心円状にGFPが拡がり、そのさらに外周にTDP-43が拡がっており、グリア細胞や神経細胞を介したTDP-43の伝播が示唆された。
神経細胞レベルでのこのTDP-43細胞間伝播メカニズムを解析するため、上記のAAVをカニクイザル胎仔大脳皮質初代培養神経細胞に接種し、免疫細胞化学的検索を行った。その結果、1.0 x 10E+10vg/mlに調整したウイルスベクターの接種により、特異的且つ効率的なFlagおよびGFP共陽性の神経細胞を多数確認できた。
また、TDP-43強制発現によるALSサルモデルにおいて、正中神経運動軸索における閾値追跡法による興奮性測定を行い、ALS患者での所見と比較検討した。持続性Na、一過性Na、fast K、slow Kの4種のイオン電流を評価し、ALS患者で認められる軸索興奮特性と類似の変化である持続性Na電流増加とfast K・slow K電流低下の所見が得られつつあり、注入側と対側の正中神経における所見と比較検討中である。
また、Onuf核を含むALS仙髄全体を、TDP-43を含む蛍光四重染色して高解像度のvirtual slide状でデジタル化し、細胞数や形態と封入体の関係を検索した。神経細胞の脱落や萎縮はOnuf核で乏しいことを定量的に初めて明らかにした。
さらに、強発光性カイアシルシフェラーゼ(GL)に着目し,ALS患者髄液中に微量に存在するエクソソームを高感度かつ定量的に検出・測定する技術開発を目的とする検討を行った.現段階では,精製エクソソーム画分に有意なGL活性は検出されておらず,表面抗原分子抗体の適切な選択が必要である.

現在までの達成度 (区分)
理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (29件)

すべて 2013 2012 その他

すべて 雑誌論文 (12件) (うち査読あり 12件) 学会発表 (17件) (うち招待講演 3件)

  • [雑誌論文] Lewy pathology in an autopsy case of FTLD-MND with reduced cardiac MIBG uptake and depletion of cardiac sympathetic fibers2013

    • 著者名/発表者名
      Nomoto N
    • 雑誌名

      Parkinsonism and Related Disorders

      巻: 19 ページ: 472-473

    • DOI

      0.1016/j.parkreldis.2012.10.011

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Isoform transition from four-repeat tau underlies dendrosomatic and regional protression of neurofibrillary pathology2013

    • 著者名/発表者名
      Hara M
    • 雑誌名

      Acta Neuropathologica

      巻: 125 ページ: 565-579

    • DOI

      10.1007/s00401-013-1097-6

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Four-repeat tau-selective deposition in subthalamic nucleus and motor2013

    • 著者名/発表者名
      Takeda K
    • 雑誌名

      Clinical Neurology Neurosurgery

      巻: 115 ページ: 641-643

    • DOI

      Clinical Neurology Neurosurgery

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Split hand syndrome in amyotrophic lateral sclerosis: different excitability changes in the thenar and hypothenar motor axons2013

    • 著者名/発表者名
      Shibuya K
    • 雑誌名

      J Neurol Neurosurg Psychiatry

      巻: 印刷中 ページ: 印刷中

    • DOI

      10.1136/jnnp-2012-304109

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Can regional spreading of amyotrophic lateral sclerosis motor symptoms be explained by prion-like propagation?2012

    • 著者名/発表者名
      Kanouchi T
    • 雑誌名

      J Neurol Neurosurg Psychiatry.

      巻: 83 ページ: 739-745

    • DOI

      10.1136/jnnp-2011-301826

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Atomic Identification of Fluorescent Q-Dots on Tau-Positive Fibrils in 3D-Reconstructed Pick Bodies2012

    • 著者名/発表者名
      Uematsu M
    • 雑誌名

      American Journal of Pathology

      巻: 180 ページ: 1394-1397

    • DOI

      10.1016/j.ajpath.2011.12.029

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Isoform-specific immunolocalization of 14-3-3- proteins in atherosclerotic lesions of human carotid and cerebral arteries2012

    • 著者名/発表者名
      Umahara T
    • 雑誌名

      Journal of Neurological Sciences

      巻: 317 ページ: 106-111

    • DOI

      10.1016/j.jns.2012.02.015

    • 査読あり
  • [雑誌論文] LRRK2 I2020T mutation is associated with tau pathology2012

    • 著者名/発表者名
      Ujiie S
    • 雑誌名

      Parkinsonism and Related Disorders

      巻: 18 ページ: 819-823

    • DOI

      10.1016/j.parkreldis.2012.03.024

    • 査読あり
  • [雑誌論文] The split hand syndrome in amyotrophic lateral sclerosis2012

    • 著者名/発表者名
      Eisen A
    • 雑誌名

      J Neurol Neurosurg Psychiatry

      巻: 83 ページ: 399-403

    • DOI

      10.1136/jnnp-2011-301456

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Age-related modulation of γ-secretase activity in non-human primate brains2012

    • 著者名/発表者名
      Nishimura M
    • 雑誌名

      J Neurochem

      巻: 123 ページ: 21-28

    • DOI

      10.1111/j.1471-4159.2012.07884.x

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Membrane-microdomain localization of amyloid β-precursor protein (APP) C-terminal fragments is regulated by phosphorylation of the cytoplasmic Thr668 residue2012

    • 著者名/発表者名
      Matsushima T
    • 雑誌名

      J Biol Chem

      巻: 287 ページ: 19715-19724

    • DOI

      10.1074/jbc.M111.334847

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide gated channels: a potential molecular link between epileptic seizures and Abeta generation in Alzheimer's disease2012

    • 著者名/発表者名
      Saito Y
    • 雑誌名

      Mol Neurodegener

      巻: 7 ページ: 50

    • DOI

      10.1186/1750-1326-7-50

    • 査読あり
  • [学会発表] Dynein Dysfunction Perturbs Intracellular Vesicle Trafficking and Synaptic Vesicle Docking via Endocytic Disturbances2013

    • 著者名/発表者名
      Kimura N
    • 学会等名
      Alzheimer’s and Parkinson’s DiseasesADPD2013
    • 発表場所
      フィレンツェ
    • 年月日
      20130306-20130310
  • [学会発表] アストログリア細胞における加齢性エンドサイトーシス障害2012

    • 著者名/発表者名
      木村展之
    • 学会等名
      第31回日本認知症学会
    • 発表場所
      つくば
    • 年月日
      20121026-20121028
  • [学会発表] 高脂血症カニクイザルを用いたAβ病態の検索2012

    • 著者名/発表者名
      岡林佐知
    • 学会等名
      第31回日本認知症学会
    • 発表場所
      つくば
    • 年月日
      20121026-20121028
  • [学会発表] 老齢サル神経細胞にみる4リピート選択的タウ沈着2012

    • 著者名/発表者名
      内原俊記
    • 学会等名
      第31回日本認知症学会
    • 発表場所
      つくば
    • 年月日
      20121026-20121028
  • [学会発表] 加齢に伴うカニクイザル脳ϒセクレターゼ活性の修飾:Aβ42産生比の増加2012

    • 著者名/発表者名
      西村正樹
    • 学会等名
      第31回日本認知症学会
    • 発表場所
      つくば
    • 年月日
      20121026-20121028
  • [学会発表] Propagation of TDP-43 in non-human primate model of ALS.2012

    • 著者名/発表者名
      Tajiri M
    • 学会等名
      Society for Neuroscience (SFN) 2012
    • 発表場所
      New Orleans
    • 年月日
      20121013-20121017
  • [学会発表] Non-human primate model of amyotrophic lateral sclerosis with cytoplasmic mislocalization of TDP-43.2012

    • 著者名/発表者名
      Ohkubo T
    • 学会等名
      2012 Annual Meeting of the American Neurological Association (ANA)
    • 発表場所
      Boston
    • 年月日
      20121006-20121009
  • [学会発表] Dynein dysfunction-mediated endocytic disturbances disrupt intracellular vesicle trafficking and synaptic vesicle docking: a potential mechanism underlying sporadic Alzheimer’s disease2012

    • 著者名/発表者名
      Kimura N
    • 学会等名
      The 11th Biennial Meeting of the Asian Pacific Society for Neurochemistry
    • 発表場所
      神戸
    • 年月日
      20120930-20121002
  • [学会発表] ALS霊長類モデルにおけるTDP-43の拡がり Propagation of TDP-43 in non-human primate model of ALS.2012

    • 著者名/発表者名
      田尻美緒
    • 学会等名
      第35回日本神経科学大会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120918-20120921
  • [学会発表] 臨床的に筋萎縮性側索硬化症の合併が疑われたMachado-Joseph病の一剖検例2012

    • 著者名/発表者名
      飯田忠恒
    • 学会等名
      第53回日本神経病理学会総会学術研究会
    • 発表場所
      新潟
    • 年月日
      20120628-20120630
  • [学会発表] ALSで残存するOnuf核の細胞病理と肛門括約筋を介した意志伝達の試み2012

    • 著者名/発表者名
      内原俊記
    • 学会等名
      第53回日本神経学会学術大会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      20120623-20120626
  • [学会発表] 筋萎縮性側索硬化症における嗅覚障害と認知障害,眼窩-側頭皮質萎縮の関係について2012

    • 著者名/発表者名
      武田貴裕
    • 学会等名
      第53回日本神経学会学術大会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      20120623-20120626
  • [学会発表] TDP-43過剰発現霊長類モデルにおけるTDP-43の拡がり.2012

    • 著者名/発表者名
      大久保卓哉
    • 学会等名
      第53回日本神経学会学術大会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      20120522-20120525
  • [学会発表] Regional cytoplasmic TDP-43 mislocalization is recapitulated in non-human primate mimicking ALS.2012

    • 著者名/発表者名
      Yokota T
    • 学会等名
      The 64th AAN Anuual Meeting
    • 発表場所
      New Orleans
    • 年月日
      20120421-20120428
  • [学会発表] Non-Human Primate Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis with Cyto-plasmicMislocalization of TDP-43.

    • 著者名/発表者名
      Yokota T
    • 学会等名
      5th International Symposium on Primate Research KUNMING 2012
    • 発表場所
      Kunming
    • 招待講演
  • [学会発表] パーキンソン病のはじまりとひろがり

    • 著者名/発表者名
      内原俊記
    • 学会等名
      徳島文理大学香川薬学部 特別講義
    • 発表場所
      徳島
    • 招待講演
  • [学会発表] ヒト脳病理からとらえるタウ、シヌクレイン沈着の最早期像

    • 著者名/発表者名
      内原俊記
    • 学会等名
      第15回兵庫臨床神経病理カンファレンス
    • 発表場所
      神戸
    • 招待講演

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公開日: 2014-07-24  

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