研究課題
以下の3つの基本プロジェクトを目的に掲げて研究を遂行した。(1)ミトコンドリア機能維持機構の基礎研究:p32全身性ノックアウトは胎生致死であった。p32ノックアウトMEF細胞株を樹立し、p32はミトコンドリア内における翻訳の高度の障害によることが明らかになった。p32はミトコンドリアリボソームの形成に重要な因子であることが明らかにした。現在組織特異的ノックアウトマウス(β細胞、心筋、血管内皮、神経)を作成中である。(2)ミトコンドリア検査診断システム:高速DNAシークエンサーを用いた、全ての部位における点変異、欠失変異を定量的に検出できる系の構築のための予備実験を進行中である。10分割したmtDNAの断片を1つのチューブで一度に定量的に増幅できる反応系の構築し、モデルサンプルに適用したが、高感度に点変異、欠失変異の両方を一度に定量できる系にたどり着いていない。(3)体細胞ミトコンドリアDNA解析:コホート研究のため、5000人の糖尿病患者の血液生化学検査値の取得とそのDNA分離が終了した。今後、上記(2)のシステムが完成した後には、mtDNAの大量解析に移る予定。またコントロールとして、久山町住人3000人分のmtDNA中の約2kbpの領域の配列を、通常のダイレクトシークエンス法ですでに決定している。この3000人の中には糖尿病患者を含む耐糖能異常者が数百人含まれおり、とりあえずこの3000人の集団の中で、耐糖能正常者と異常者とのあいで、SNP解析を行い、P値が0.001未満の候補SNPを見出した。このSNPmtDNAと対照mtDNAを持つ2種類のサイブリッド細胞を作製した。この両細胞間のエネルギー代謝、インスリン様成長因子(IGF)に対する反応性の違いなどを解析中である。
2: おおむね順調に進展している
次世代高速DNAシークエンサーを用いた、全ての部位における点変異、欠失変異を一度に高感度に定量的に検出できる系を構築する系以外は、解析は予定通り進んでいる。
点変異、欠失変異を一度に高感度に定量的に検出する系に関しては、タイプの違う次世代シークエンサーの利用を計画中である。それでも困難な場合は、特にこれまで例のないあらゆる欠失変異を高感度に定量的出来る系の構築を一時ペンディングし、配列を高速決定するだけの系の構築に切り替えることも考慮中である。
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