ウイルス因子による自己免疫疾患発症モデルの開発

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22300140
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 八神 健一 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (40166476)
• キーワード: 疾患モデル / マウス / パルボウイルス / 自己免疫病

研究概要

本年度は、ウイルス因子を導入するためのウイルスベクターの作製とその評価を実施した。
1.parvovirus NS-EGFP発現ベクターの作製
Rat parvovirus UT株のnon-structural protein(NS)及びレポーター遺伝子(EGFP)を発現するレトロウイルスベクターと対照とするEGFのみを発現するレンチウイルスベクターを作製した。ベクターの構造は、NSと選別マーカーおよびEGFPを共発現するようIRES配列をはさんで連結し、導入遺伝子の確実な発現のためにサイレンシングが起きないようprimer binding siteに変異を加えたMolony murine leukemia virus(MoMuLV)LTRを5'側に、negative control regionを除いたPCMV-LTRを3'側に付加したものである。
作製した2種のベクターの評価のため、ラットTリンパ腫細胞株C58(NT)Dに感染させ、EGFを指標として安定的に導入遺伝子を発現する細胞クローンを得た。NS-EGFP発現ベクターを感染させたクローンでは、NSの安定な発現も確認された。
2.NS発現によるTリンパ球サブセットの推移の検討
In vivo及びin vitroで、NS発現ベクターをコラーゲン関節炎好発系であるDBA/1マウスリンパ球に上記ベクターを感染させ、Tリンパ球サブセットをフローサイトメーターで検討するため、高濃度のウイルスベクターが必要となる。現在、ベクターの回収効率が不十分であるため、まず、in vitroでの検討を開始した。また、NSによる感染リンパ球のメチル化修飾について、DNAメチル化プロファイルの変化を確認中である。

研究成果

• [雑誌論文] Simultaneous Detection of Antibodies to Mouse Hepatitis Virus Recombinant Structural Proteins by a Microsphere-Based Multiplex Fluorescent Immunoassay. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kunita S, Kato K, Ishida M, Hagiwara K, Kameda S, Ishida T, Takakura A, Goto K, Sugiyama F, Yagami KI.
  • 雑誌名: Clin Vaccine Immunol.
  • 査読あり
• [学会発表] パルボウイルス感染細胞におけるDNAメチル化を介した再感染抵抗性の獲得 (2010)
  • 著者名/発表者名: 今野裕土、小林謙介、伊関大敬、國田智、杉山文博、八神健一
  • 学会等名: 第57回日本実験動物学会
  • 発表場所: 京都テルサ(京都府)
  • 年月日: 2010-05-12
• [学会発表] 蛍光マイクロビーズ法によるマウス・ラット感染症のマルチプレックス抗体検査 (2010)
  • 著者名/発表者名: 國田智、加藤花名子、亀田周子、石田智子、高倉彰、後藤一雄、池郁生、有川二郎、大沢一貴、杉山文博、八神健一
  • 学会等名: 第57回日本実験動物学会
  • 発表場所: 京都テルサ(京都府)
  • 年月日: 2010-05-12
• [備考]
  • URL: http://www.md.tsukuba.ac.jp/basic-med/yagami/parvo.html