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2012 年度 実績報告書

単一細胞内成分の高性能分離分析法の開発と応用

研究課題

研究課題/領域番号 22350036
研究機関岡山大学

研究代表者

金田 隆  岡山大学, 自然科学研究科, 教授 (20243909)

研究期間 (年度) 2010-04-01 – 2013-03-31
キーワードキャピラリー電気泳動 / レーザー励起蛍光 / 糖タンパク質 / 二色レーザー励起 / 抗がん剤 / 多剤耐性タンパク質
研究概要

ポストカラム誘導体化反応器を備えた二色レーザー励起蛍光検出器を開発し、糖タンパク質分析への応用に成功した。検出器は450 nmと532 nmで発振する二つのレーザーを用いるものである。二つのレーザーの光路にビームストッパーを置き、交互に開閉することで、450 nmと532 nmのレーザーを交互にキャピラリーに照射した。この方式により、各波長で励起したときの二つの電気泳動図を同時に記録することに成功した。この検出器を利用して、糖タンパク質計測法について検討した。開発した検出器では、すべてのタンパク質は、ナフタレン-2.3-ジカルボアルデヒドによるポストカラム誘導体化により450 nm励起で検出できる。一方、糖鎖は、532 nmで励起できる蛍光色素で標識したコンカナバリンAと反応させて検出した。すなわち、タンパク質は糖鎖の有無に関わらず450 nm励起で検出され、糖鎖をもつタンパク質はコンカナバリンAと結合するため、532 nm励起でも検出される。したがって、コンカナバリンAと反応するタンパク質のみが、450 nm励起と532 nm励起の両方の電気泳動図で同じ泳動時間に検出される。この検出原理に基づき、同時に得られる二つの電気泳動図を比較することで、糖タンパク質と糖鎖修飾を受けていないタンパク質が識別できることを実証した。 また、生体内分子であるグアノシン-5’-一リン酸(GMP)により形成される会合体(G-gel)と種々の芳香族化合物の相互作用をキャピラリー電気泳動により評価することに成功した。G-gelの濃度を変化させ、芳香族化合物の電気泳動速度を計測することで、G-gelの分子認識能を評価した。その結果、G-gelと芳香族化合物との相互作用は、G-gelの疎水環境へのインターカレーション、G-gelと芳香族化合物間の水素結合や疎水結合が重要な相互作用であることがわかった。

現在までの達成度 (区分)
理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (23件)

すべて 2013 2012 その他

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (17件) (うち招待講演 1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Determination of association constants between 5’-guanosine monophosphate gel and aromatic compounds by capillary electrophoresis2013

    • 著者名/発表者名
      Kaori Yamaguchi, Nobuyuki Takeyasu, Takashi Kaneta
    • 雑誌名

      Journal of Chromatography A

      巻: 1288 ページ: 149-154

    • DOI

      10.1016/j.chroma.2013.02.090

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Determination of polyamines in Arabidopsis thaliana by capillary electrophoresis using salicylaldehyde-5-sulfonate as a derivatizing reagent2013

    • 著者名/発表者名
      Genki Inoue, Takashi Kaneta, Toshio Takayanagi, Junichi Kakehi, Hiroyasu Motose, Taku Takahashi
    • 雑誌名

      Analytical Methods

      巻: Accepted ページ: Accepted

    • DOI

      10.1039/C3AY26360F

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Sheath-flow electrochemical detection of amino acids with a copper wire electrode in capillary electrophoresis2012

    • 著者名/発表者名
      Junji Inoue, Takashi Kaneta, Totaro Imasaka
    • 雑誌名

      Electrophoresis

      巻: Vol.33 ページ: 2743-2747

    • DOI

      DOI:10.1002/elps.201200059.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Determination of Arsenic(III) by Sequential Injection/ Anodic Stripping Voltammetry (SI/ASV) Using In-situ Thin Film-Modified Screen-Printed Carbon Electrode (SPCE)2012

    • 著者名/発表者名
      Eakkasit Punrat, Suchada Chuanuwatanakul, Orawan Chailapakul, Toshio Takayanagi, Takashi Kaneta, Shoji Motomizu
    • 雑誌名

      Journal of Flow Injection Analysis

      巻: Vol.29 ページ: 11-16

    • URL

      http://jafia.kyushu-u.ac.jp/japanese/jfia/contents/29_1/HP/JFIA29%281%29%282012%29PP.11.pdf

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Band broadening of DNA fragments isolated by polyacrylamide gel electrophoresis in capillary electrophoresis2012

    • 著者名/発表者名
      Takashi Kaneta, Takehito Ogura, Shuhei Yamato, Totaro Imasaka
    • 雑誌名

      Journal of Separation Science

      巻: Vol.35 ページ: 431-435

    • DOI

      DOI:10.1002/jssc.201100909

    • 査読あり
  • [学会発表] Measurement of Multiply-labeled Proteins by Capillary Electrophoresis2013

    • 著者名/発表者名
      Keisuke Kanaji, Takashi Kaneta
    • 学会等名
      BK21 Symposium on Chemical Materials Science
    • 発表場所
      Korea
    • 年月日
      20130214-20130215
  • [学会発表] Selective Detection of Glycoproteins by Two-Color Laser-Induced Fluorescence in Capillary Electrophoresis2013

    • 著者名/発表者名
      Takashi Kaneta, Ayumi Tabara
    • 学会等名
      Pure and Applied Chemistry International Conference
    • 発表場所
      Thailand
    • 年月日
      20130123-20130125
    • 招待講演
  • [学会発表] フロー分析用電気化学発光検出の開発2012

    • 著者名/発表者名
      赤瀬大祐,金田隆
    • 学会等名
      第29 回イオンクロマトグラフィー討論会
    • 発表場所
      岡山理科大
    • 年月日
      20121206-20121207
  • [学会発表] グアノシンゲルの分子認識能評価の研究2012

    • 著者名/発表者名
      山口 佳織,金田隆
    • 学会等名
      第29 回イオンクロマトグラフィー討論会
    • 発表場所
      岡山理科大
    • 年月日
      20121206-20121207
  • [学会発表] 二色レーザー励起蛍光検出による糖タンパク質の選択的検出2012

    • 著者名/発表者名
      金田隆,田原彩裕美
    • 学会等名
      第32回キャピラリー電気泳動シンポジウム
    • 発表場所
      産業技術総合研究所関西センター
    • 年月日
      20121107-20121109
  • [学会発表] Determination of Polyamines in Arabidopsis by Capillary Electrophoresis Using Salicylaldehyde-5-sulfonate as a Derivatizing Reagent2012

    • 著者名/発表者名
      Takashi Kaneta, Genki, Inoue, Toshio Takayanagi, Junichi Kakehi, Hiroyasu Motose, Taku Takahashi
    • 学会等名
      ITP2012
    • 発表場所
      U.S.A.
    • 年月日
      20120929-20121003
  • [学会発表] Effect of flow patterns on the determinations of metal ions using sequential injection system coupled with anodic stripping voltammetry2012

    • 著者名/発表者名
      Eakkasit Punrat, Takashi Kaneta, Suchada Chuanuwatanakul, Shoji Motomizu, Orawon Chailapakul
    • 学会等名
      Flow analysis XII
    • 発表場所
      Greece
    • 年月日
      20120923-28
  • [学会発表] Method development for the determination of arsenic by sequential injection/anodic stripping voltammetry using long-lasting gold film-modified screen-printed carbon electrode2012

    • 著者名/発表者名
      Eakkasit Punrat, Takashi Kaneta, Suchada Chuanuwatanakul, Shoji Motomizu, Orawon Chailapakul
    • 学会等名
      Flow analysis XII
    • 発表場所
      Greece
    • 年月日
      20120923-28
  • [学会発表] フロー分析用電気化学発光検出の開発とアスコルビン酸分析への応用2012

    • 著者名/発表者名
      赤瀬大祐,金田隆
    • 学会等名
      日本分析化学会第61年会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20120919-20120921
  • [学会発表] 二色レーザー励起蛍光検出・キャピラリー電気泳動による生体高分子複合体計測法の開発2012

    • 著者名/発表者名
      田原彩裕美,金田隆
    • 学会等名
      日本分析化学会第61年会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20120919-20120921
  • [学会発表] キャピラリー電気泳動によるグアノシンゲルの分子認識能評価2012

    • 著者名/発表者名
      山口佳織,金田隆
    • 学会等名
      日本分析化学会第61年会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20120919-20120921
  • [学会発表] シーケンシャルインジェクション/SPCEボルタンメトリー用フローセルの試作2012

    • 著者名/発表者名
      akkasit Punrat,Suchada Chuanuwatanakul,Orawon Chailapakul,樋口慶郎,本水昌二,金田隆
    • 学会等名
      日本分析化学会第61年会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20120919-20120921
  • [学会発表] スクリーンプリントカーボン電極(SPCE)を用いるSIA/ボルタンメトリーによるヒ素の高感度定量2012

    • 著者名/発表者名
      Eakkasit Punrat,Suchada Chuanuwatanakul,Orawon Chailapakul,樋口慶郎,本水昌二,金田隆
    • 学会等名
      日本分析化学会第61年会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20120919-20120921
  • [学会発表] キャピラリー電気泳動法による多重標識タンパク質の分離計測2012

    • 著者名/発表者名
      金地啓介、金田隆
    • 学会等名
      第18回中国四国支部分析化学若手セミナー
    • 発表場所
      山口県セミナーパーク
    • 年月日
      20120831-20120901
  • [学会発表] キャピラリー電気泳動法による水溶液内イオン会合の解析2012

    • 著者名/発表者名
      東谷直樹、金田隆
    • 学会等名
      第18回中国四国支部分析化学若手セミナー
    • 発表場所
      山口県セミナーパーク
    • 年月日
      20120831-20120901
  • [学会発表] キャピラリー電気泳動法によるテトラフェニルボレート誘導体と一価陽イオンの水溶液内イオン会合解析2012

    • 著者名/発表者名
      東谷直樹,高柳俊夫,金田隆
    • 学会等名
      第72回分析化学討論会
    • 発表場所
      鹿児島大学
    • 年月日
      20120519-20120520
  • [学会発表] 二波長検出キャピラリー電気泳動法によるタンパク質の標識効率の評価2012

    • 著者名/発表者名
      金地啓介,高柳俊夫,金田隆
    • 学会等名
      第72回分析化学討論会
    • 発表場所
      鹿児島大学
    • 年月日
      20120519-20120520
  • [備考] 岡山大学大学院自然科学研究科(理学系) 分析化学研究室

    • URL

      http://chem.okayama-u.ac.jp/~analytical/home_j.html

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公開日: 2014-07-24  

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