ブタ卵の遠心・融合再構築法による生殖工学基盤・応用技術の確立

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22380153
• 研究機関: 独立行政法人農業生物資源研究所
• 研究代表者: 菊地 和弘 独立行政法人農業生物資源研究所, 動物発生分化研究ユニット, 上級研究員 (20360456)
• 研究分担者: 柏崎 直巳 麻布大学, 獣医学部, 教授 (90298232)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 応用動物 / 発生分化 / 発生工学 / 細胞操作 / 受精

研究概要

最終年度（H25年度）は交付申請書に記載した「研究の目的」に従い、以下の１～３について検討を行った。１）多精子受精回避するために小片の遠心融合法により単精子受精卵の作製を行う実験に関しては、精子を1個含む小片(SP+)と含まない小片(SP-)を分別できた。また対照区として受精させていない卵から小片(cont)を作出した。これらの小片と成熟卵を電気融合して10時間体外培養したところ、SP+とSP-を融合した場合は高い卵活性化率(=雌性前核形成率、それぞれ86.6%ならびに76.2%)が得られたが、contを融合した場合は23.2%と低かった。受精卵の細胞質には卵を活性化させる因子が含まれることが示唆された。２）再構築により脂肪滴の含まれない再構築成熟卵や胚を作出する実験に関しては、再構築卵をガラス化冷却処理を行い一定期間の超低温保存後に加温し短時間(1時間)培養し生存性を確認ところ、生存卵は得られなかった。ガラス化冷却の際の耐凍剤の選択ならびにその至適濃度を検討する必要が示唆された。３）卵再構築技術をクローン胚作出法に応用する実験に関しては予備実験を行ったものの研究期間内の研究成果の提示は完結できなかった。今後別な機会を作り研究を継続させたい。これらの事より、期間内での研究を概ね執り行うことができたと考えられる。

現在までの達成度 (区分)

理由

25年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

25年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Normal reproductive development of pigs produced using sperm retrieved from immature testicular tissue cryopreserved and grafted into nude mice (2014)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K, Tanihara F, Noguchi J, Nakai M, Ito J, Kashiwazaki N
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 未定 ページ: 未定
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2014.04.012.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Roles of the zona pellucida and functional exposure of the sperm-egg fusion factor ‘IZUMO’ during in vitro fertilization in pigs (2014)
  • 著者名/発表者名: Tanihara F, Nakai M, Nguyen T.M, Kato N, Kaneko H, Noguchi J, Otoi T, Kikuchi K
  • 雑誌名: Animal Science Journal 巻: 85 ページ: 395-404
  • DOI: 10.1111/asj.12164
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of cytoskeletal integrity, fertilization and developmental competence of oocytes vitrified before or after in vitro maturation in a porcine model (2013)
  • 著者名/発表者名: Egerszegi I, Kikuchi K ほか.
  • 雑誌名: Cryobiology 巻: 67 ページ: 287-292
  • DOI: 10.1016/j.cryobiol.2013.08.009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fertilization ability of porcine oocytes reconstructed from ooplasmic fragments produced and characterized after serial centrifugations (2013)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K, Nakai M, Tanihara F, Noguchi J, Kaneko H, Dang-Nguyen T.Q, Men N.T, Hanh N.V, Somfai T, Nguyen B.X, Nagai T, Manabe N
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 59 ページ: 549-556
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improved developmental ability of porcine oocytes grown in nude mice after fusion with cytoplasmic fragments prepared by centrifugation: A model for utilization of primordial oocytes (2013)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Nakai M, Tanihara F, Noguchi J, Kikuchi K
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 88 ページ: 887-892
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2013.07.014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of zona pellucida function for sperm penetration during in vitro fertilization in pigs (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanihara F, Nakai M, Kaneko H, Noguchi J, Otoi T, Kikuchi K (2013) Evaluation of zona pellucida function for sperm penetration during in vitro fertilization in pigs
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 59 ページ: 385-392
  • 査読あり
• [雑誌論文] Generation of live piglets for the first time using sperm retrieved from immature testicular tissue cryopreserved and grafted into nude mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K, Nakai M, Somfai T, Noguchi J, Tanihara F, Ito J, Kashiwazaki N
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 ページ: e70989
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0070989.
  • 査読あり
• [学会発表] cent progress on pig genetic resources: Cryopreservation of gametes and gonadal tissues (2014)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Nakai M, Somfai T, Noguchi J, Tanihara F, Ito J, Kashiwazaki N, Nagai T, Kaneko H
  • 学会等名: The 2nd Symposium of the Thai Society for Animal Reproduction
  • 発表場所: タイ, バンコック
  • 年月日: 20140320-20140321
  • 招待講演
• [学会発表] New perspectives of in vitro gamete preservation: Xenografting of testicular tissues (2013)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Nakai M, Somfai T, Noguchi J, Tanihara F, Ito J, Kashiwazaki N, Kaneko H
  • 学会等名: 2nd Fatty pig Conference
  • 発表場所: ハンガリー, ブダペスト
  • 年月日: 20131120-20131121
  • 招待講演