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(1)肝中皮細胞系譜におけるTGF-betaシグナリング経路の機能解析
TGF-beta シグナリング経路を胚性中皮細胞特異的に阻害するために、WT1-CreERT2(+/-); DNAT2(+/-)胚とWT1-CreERT2(+/-); 3tTom(+/-)胚(コントロール)を交配により作成し、E10.5にてタモキシフェン投与によりCreERT2を活性化させdnALK5を胚性中皮細胞特異的に発現させた。E13.5において肝臓における胚性中皮細胞系譜の分布をコントロール胚(WT1-CreERT2(+/-); 3tTom(+/-))と比較・解析したところ、肝中皮の薄層化と肝組織内に分布するはずの血管外壁を構成する細胞集団の低形成が観察された。このことは肝中皮細胞系譜の維持と分化にTGF-betaシグナリング経路が関与していることを示している。
(2)肝芽細胞系譜におけるTGF-betaシグナリング経路の機能解析
TGF-betaシグナリング経路を肝芽細胞特異的に阻害するために、FoxA2-EGFP-CreER(+/-); DNAT2(+/-)胚を交配により作成し、E8.5にてタモキシフェン投与によりCreERT2を活性化させdnALK5を肝芽細胞特異的に発現させた。E11.5-13.5肝臓における肝芽細胞の分布をコントロール胚(FoxA2-EGFP-CreER(+/-); 3tTom(+/-))と比較・解析したところ、肝芽細胞の分枝の低形成が観察された。また低濃度タモキシフェンの投与によりCreERT2をパッチ状に活性化させ、dnALK5強制発現細胞のクローン解析を行ったところ、dnALK5の強制発現によりE11.5以降における肝芽細胞クローンの拡大が明らかに抑制された。このことは肝芽細胞の形態形成にTGF-betaシグナリング経路が関与していることを示している。
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