内皮リパーゼを標的とした動脈硬化治療法の新たな戦略ー遺伝子改変ウサギを用いた研究

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22390068
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 範 江林 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (60272192)
• 研究分担者: 北嶋 修司 佐賀大学, 総合分析実験センター, 准教授 (70284643) ; 小池 智也 神戸大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40432158)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• キーワード: 内皮リパーゼ / 動脈硬化 / HDL / ウサギ / 高脂血症 / アンチセンス

研究概要

本年度では引き続き内皮リパーゼを過剰発現させるトランスジェニックウサギの作製を試みた。今回の実験では、1081個のウサギ受精卵へのマイクロインジェクションを行い、32羽の仮親ウサギへの移植を行った。そのうち、12羽の仮親ウサギの妊娠が確認され、18羽の子ウサギを出産した。Southern blot並びにPCR法にて測定した結果、内皮リパーゼ遺伝子が導入されたポジのウサギは２羽が確認された。現在は、この２羽ウサギの解析と繁殖を行っている。ISIS社より提供されたウサギ内皮リパーゼアンチセンスを用いて正常JWウサギ並びにWHHLウサギに静注実験を行った。センス投与群と比べて、内皮リパーゼアンチセンスの投与により、JWウサギの血清高密度リポ蛋白値が上昇している傾向が確認されたが、総コレステロールや中性脂肪の変化は認められなかった。リポ蛋白分画をHPLCにより分析した結果、粒子の大きい高密度リポ蛋白のコレステロールとリン質の量が内皮リパーゼアンチセンスの投与により、著しく上昇していることが認められた。同様の方法で内皮リパーゼアンチセンスを高脂血症動物モデルであるWHHLウサギに投与した。WHHLウサギの血清高密度リポ蛋白値の変化はJWウサギと同様であったが、内皮リパーゼアンチセンスの抗動脈硬化作用は認められなかった。以上の結果は2012年のJ Atheroscler Thromb誌に発表している。更に、内皮リパーゼの分子構造と阻害剤との相互作用を調べるために、生物情報科学技術を利用して、内皮リパーゼ分子3D構造を解析したとともに、脂質代謝にも重要な酵素である肝リパーゼとリポタンパクリパーゼの構造特徴を比較した。これらの研究成果はすでに2013年のPLoS ONEに発表される予定となっている。

現在までの達成度 (区分)

理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Production of apolipoprotein c-iii knockout rabbits using zinc finger nucleases. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yang, D. et al.
  • 雑誌名: Journal of Visualized Experiments 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analyses of lipoprotein lipase, hepatic lipase and endothelial lipase and their binding properties with known inhibitors (2013)
  • 著者名/発表者名: Wang, Z. et al.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression systems and species used for transgenic animal bioreactors. (2013)
  • 著者名/発表者名: Wang, Y.
  • 雑誌名: Biomed Res Internat. 巻: 2013 ページ: 580463-580469
  • DOI: 10.1155/2013/580463
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human apolipoprotein AII protects against diet-induced atherosclerosis in transgenic rabbits. (2013)
  • 著者名/発表者名: Wang, Y.
  • 雑誌名: Arterioscler Thromb Vas Biol. 巻: 33 ページ: 224-231
  • DOI: 10.1161/ATVBAHA.112.300445
  • 査読あり
• [雑誌論文] Endothelial lipase mediates hdl levels in normal and hyperlipidemic rabbits. (2012)
  • 著者名/発表者名: Zhang, J.
  • 雑誌名: J Atheroscler Thromb. 巻: 19 ページ: 213-226
  • DOI: 10.5551/jat.11148
  • 査読あり
• [雑誌論文] C-reactive protein is associated with the progression of acute embolic stroke in rabbit model. (2012)
  • 著者名/発表者名: Yu, Q.
  • 雑誌名: J Thromb Thrombolysis. 巻: 33 ページ: 301-307
  • DOI: 10.1007/s11239-011-0627-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] C-reactive protein levels are associated with the progression of atherosclerotic lesions in rabbits. (2012)
  • 著者名/発表者名: Yu, Q.
  • 雑誌名: Histol Histopathol. 巻: 27 ページ: 529-535
  • 査読あり
• [雑誌論文] High-dose rosiglitazone is pro-atherogenic in cholesterol-fed rabbits. (2012)
  • 著者名/発表者名: Wang, Y.
  • 雑誌名: Atherosclerosis. 巻: 222 ページ: 292-294
  • DOI: 10.1016/j.atherosclerosis.2012.01.048
  • 査読あり
• [学会発表] Human apolipoprotein AII in atherosclerosis: an old guy has a new function? (2012)
  • 著者名/発表者名: Fan, J.
  • 学会等名: Taishan Academic Forum: The 2nd International Forum of ATVB
  • 発表場所: Lijing Xintiandi Hotel (Taian, China)
  • 年月日: 20121207-20121209
  • 招待講演
• [学会発表] Human apolipoprotein A-II protects against diet-induced atherosclerosis in transgenic rabbits. (2012)
  • 著者名/発表者名: Fan, J.
  • 学会等名: American Heart Association Scientific Sessions 2012
  • 発表場所: Los Angeles Convention Center (Los Angeles, CA)
  • 年月日: 20121103-20121107
  • 招待講演
• [学会発表] Human apolipoprotein A-II protects against diet-induced atherosclerosis in transgenic rabbits. (2012)
  • 著者名/発表者名: Wang, Y.
  • 学会等名: 第101回日本病理学会総会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都）
  • 年月日: 20120426-20120428
• [学会発表] Immunohistochemical demonstration of apolipoprotein B-48 in the lesions of human atherosclerosis. (2012)
  • 著者名/発表者名: Liu, Z.
  • 学会等名: 第101回日本病理学会総会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都）
  • 年月日: 20120426-20120428
• [備考] 山梨大学医学工学総合研究部分子病理学講座
  • URL: http://www.med.yamanashi.ac.jp/clinical_basic/pathol01/
• [産業財産権] 急性心臓死ウサギモデル、およびその作製方法 (2013)
  • 発明者名: 範 江林
  • 権利者名: 山梨大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2013-101525
  • 出願年月日: 2013-05-13