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Themisのシグナル伝達における機能についての解析を研究実施計画の通り行った。Themisノックアウトマウスにおいては、TCR刺激によるIL-2の産生が著しく低下していることが新たに明らかとなった。逆に、Themisを過剰発現させたTgマウスにおいては、IL-2の産生が亢進していた。Themisは末梢の成熟Ｔ細胞では発現が低下するが、成熟Ｔ細胞におけるIL-2産生を正に制御していることが明らかとなった。しかしながら、ThemisノックアウトＴ細胞においても、Themis-TgＴ細胞においても、TCR依存性のERKの活性化、カルシウム流入、LATのリン酸化など、シグナル伝達の変化は見つかっていない。Themisは刺激依存性にチロシンリン酸化を受け、LAT、PLCγ、Sos等と結合することから、TCR刺激を受けるとLATシグナロソームに取り込まれるものと考られているが、TCRシグナル伝達の強弱を制御しているという積極的なデータはいまだ得られていない。
そこで、Themisの分子内各ドメインの機能解析を行った。CABIT1、CABIT2、核移行配列（NLS）およびプロリンリッチ配列（PRS）を欠失したThemis分子のトランスジェニックマウスをThemis KOに交配し、Themis分子内ドメインの機能を検証したところ、いずれのマウスにおいても、Grb2との結合、刺激依存性リン酸化、および正の選択の誘導が阻害されており、これら全てのドメインがThemisの機能発現に必須であることが示された。
いっぽう、CABIT1欠失変異体とNLS変異体のみがThemis蛋白の核内移行を喪失し、さらに、CABIT1欠失変異体のみが、ドミナントネガティブ型のT細胞分化阻害を示した。以上の結果から、Themis中の２つのCABITドメインはそれぞれ異なる機能を持っていることが明らかとなった。
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