巨核球産生ニッチの可視化とニッチにおけるNotchシグナルの機能解析

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22390191
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 千葉 滋 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (60212049)
• キーワード: 巨核球 / ニッチ / Notch / CD42a / レポーター / トロンボポエチン

研究概要

骨髄巨核球(Mgk)の分化初期段階からマーキングし、骨髄におけるMgk産生ニッチを可視化し、Mgk産生過程を解析することとした。マウス骨髄細胞においてMgkの比較的後期分化マーカーとされるCD42bの発現を解析したところ、これまで発現が確認されていなかったcommon myeloid progenitor(CMP)の一部がCD42bを発現していることを見いだした。また、CD42b陽性CMP細胞は高い巨核球コロニー形成能を有していた。これまでMgkの前駆細胞はCD34陰性の前駆細胞分画であるmegakaryocyte-erythroid progenitor(MEP)にあるとされていたが、今回の結果はこの説を覆すとともに、CD42bが初期Mgk前駆細胞のマーキングに適していることを示唆している。そこでCD42bプロモーター下でDsRedを発現させるコンストラクトを作製し、Mgk分化能を有するHEL細胞およびMgk分化能を有さないJurkat細胞に導入し、分化に伴ってレポーター遺伝子が発現するかを確認した。その結果、HEL細胞に導入し、トロンボポエチン(TPO)により分化を誘導したときのみ、フローサイトメトリーでDsRedの発現が見られた。このレポータープラスミドからCD42b-DsRed発現ユニットを切り出し、トランスジェニックマウスを作製する準備を進めている。一方、TPO受容体であるMpl遺伝子ノックアウトマウスMpl-/-およびNotchシグナル分子RBP-JKを造血幹細胞で欠損させるマウスRBPf/f・Mx-Creのコロニーを作製した。またマウスTPOの中和抗体を大量に入手した。現在交配を進め、Mpl-/-・RBPf/f・Mx-Creマウスを作製している。またTPO中和抗体をRBPf/f・Mx-Creに投与後、pIpCにより造血幹細胞レベルでNotchシグナルをオフにした際のMgk系細胞の産生障害について解析を行う予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Procoagulant properties of microparticles released from red blood cells in paroxysmal nocturnal haemoglobinuria (2011)
  • 著者名/発表者名: Yukinori Kozuma
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 巻: 152 ページ: 631-639
  • DOI: 10.1111/j.1365-2141.2010.08505.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Notch2 signaling is required for proper mast cell distribution and mucosal immunity in the intestine (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakata-Yanagimoto M, Sakai T, Miyake Y, Saito TI, Maruyama H, Morishita Y, Nakagami- Yamaguchi E, Kumano K, Yagita H, Fukayama M, Ogawa S, Kurokawa M, Yasutomo K, Chiba S.
  • 雑誌名: Blood 巻: 117 ページ: 128-134
  • 査読あり
• [雑誌論文] A nonradiation-containing, intermediate-dose methotrexate regimen for elderly patients with primary central nervous system lymphoma (2010)
  • 著者名/発表者名: Taoka K, Okoshi Y, Sakamoto N, Takano S, Matsumura A, Hasegawa Y, Chiba S.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 92 ページ: 617-623
  • 査読あり
• [雑誌論文] Treatment of central nervous system lymphoma in rats with intraventricular rituximab and serum (2010)
  • 著者名/発表者名: Miyake Y, Okoshi Y, Machino T, Chiba S.
  • 雑誌名: International Journal of Hematology 巻: 92 ページ: 474-480
  • 査読あり
• [雑誌論文] Difference in blood tacrolimus concentration between ACMIA and MEIA in samples with low haematocrit values (2010)
  • 著者名/発表者名: Doki K, Homma M, Hori T, Tomita T, Hasegawa Y, Ito S, Fukunaga K, Kaneko M, Chiba S, Sumida T, Ohkohchi N, Kohda Y.
  • 雑誌名: Journal of Pharmacy and Pharmacology 巻: 62 ページ: 1185-1188
  • 査読あり
• [雑誌論文] Notch2 signaling is required for potent anti-tumor immunity in vivo (2010)
  • 著者名/発表者名: Sugimoto K, Maekawa Y, Kitamura A, Nishida J, Koyanagi A, Yagita H, Kojima H, Chiba S, Shimada M, Yasutomo K.
  • 雑誌名: Journal of Immunology 巻: 184 ページ: 4673-4678
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hesl immortalizes committed progenitors and plays a role in blast crisis transition in chronic myelogenous leukemia (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakahara F, Sakata-Yanagimoto M, Komeno Y, Kato N, Uchida T, Haraguchi K, Kumano K, HaradaY, Harada H, Kitaura J, Ogawa S, Kurokawa M, Kitamura T, Chiba S.
  • 雑誌名: Blood 巻: 115 ページ: 2872-2881
  • 査読あり
• [学会発表] Notch signaling as a mediator of myeloid differentiation and leukemic transformation (2010)
  • 著者名/発表者名: Sakata-Yanagimoto M, Chiba S.
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: ポートピアホテル(神戸)
  • 年月日: 2010-12-08
• [学会発表] Profiling of multiple gene mutations in myelodysplastic syndromes using high-throughput resequenceing combined with barcode labeling (2010)
  • 著者名/発表者名: Nagata Y, Sanada M, Yoshida K, Nakaya T, Matsubara A, Obara N, Ishiyama N, Miyawaki S, Takita J, Chiba S, Shih L-Y, Koeffler HP, Ogawa S.
  • 学会等名: The American Society of Hematology 52nd Annual Meeting
  • 発表場所: オーランド(米国フロリダ州)
  • 年月日: 2010-12-06
• [学会発表] Whole exome analysis of myelodysplastic syndromes using next-generation resequencing technology (2010)
  • 著者名/発表者名: Yoshida K, Sanada M, Nagata Y, Kawahata R, Kato M, Matsubara A, Takita J, Mori H, Ishiyama K, Ishikawa T, Miyawaki S, Obara N, Chiba S, Ogawa S.
  • 学会等名: The American Society of Hematology 52nd Annual Meeting
  • 発表場所: オーランド(米国フロリダ州)
  • 年月日: 2010-12-06
• [学会発表] Distinct roles of Notch signaling and Hes-1 on hematopoietic cell differentiation fate (2010)
  • 著者名/発表者名: Chiba S.
  • 学会等名: Notch and Stem Cells
  • 発表場所: アテネ(ギリシャ)
  • 年月日: 2010-10-04
• [学会発表] Retrospective analysis of BCL2+DCBCL in the rituximab era : multi-center analysis (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishikii H, Nakamura N, Kondo Y, Kojima M, Takizawa J, Hasegawa Y, Okoshi Y, Suzukawa K, Yokoyama Y, Obara N, Sakata-Yanagimoto M, Noguchi M, Aoki M, Ando K, Chiba S.
  • 学会等名: 第72回日本血液学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(横浜)
  • 年月日: 2010-09-25
• [学会発表] Outcome of methotrexate-based chemotherapy without whole-brain-irradiation in elderly PCNCL (2010)
  • 著者名/発表者名: Taoka K, Okoshi Y, Suzukawa K, Takano S, Matsumura A, Hasewaga Y, Chiba S.
  • 学会等名: 第72回日本血液学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(横浜)
  • 年月日: 2010-09-25
• [図書] 血液2011(Annual Review) (2011)
  • 著者名/発表者名: 千葉滋(分担執筆)
  • 総ページ数: 229
  • 出版者: 中外医学社
• [図書] 血液疾患最新の治療2011-2013 (2010)
  • 著者名/発表者名: 千葉滋(分担執筆)
  • 総ページ数: 408
  • 出版者: 南江堂