新規がん幹細胞モデルマウスの作製とＭＬＬ関連白血病発生の分子基盤

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22390206
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 野阪 哲哉 三重大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30218309)
• 研究分担者: 北村 俊雄 東京大学, 医科学研究所, 教授 (20282527)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• キーワード: MLL / 白血病幹細胞 / がん幹細胞 / 造血幹細胞 / 白血病モデルマウス / PLZF

研究概要

Cre リコンビナーゼとloxP配列を用い、MLL-ENL遺伝子が誘導発現するトランスジェニックマウスを作製した。このトランスジェニックマウスの骨髄細胞からCD34-KSL分画(造血幹細胞)とCD34+KSL分画(造血前駆細胞)を単離し、Cre発現レトロウイルスを感染させて、それらの細胞集団にMLL-ENLを誘導発現させ、colony 継代assayを行ったところ、MLL-ENLは造血幹細胞のみをtransformした。そして、cDNA microarray解析により、造血幹細胞特異的に発現している遺伝子PLZFを同定した。PLZFノックダウン実験では、MLL-ENLが造血幹細胞をtransformする活性が低下した。同様の現象はin vivoの二次移植実験においても観察された。さらに、野生型PLZF遺伝子を強制発現すると、マウス骨髄細胞が不死化され、ポリコーム分子Bmi-1との相互作用が消失する変異体では不死化は起こらなかった。また、PLZFプロモーターを用いたレポーターassayによりMLL-ENL発現がPLZF転写を増強すること、公共データベース上のヒト白血病細胞における遺伝子発現プロファイル解析（GSEA）にてPLZF強発現のMLL関連AMLは造血幹細胞に近いプロファイルを持つことを明らかにした。以上の結果は、MLL-ENLによる造血幹細胞のtransformationにおいて、PLZFが重要な役割を果たしていることを示唆する。さらに、MLL-ENLにより発現が増強する別の造血幹細胞特異的発現遺伝子Bにも着目し、当該遺伝子のコンディショナルノックアウトマウスを作製した。現在Floxedホモの状態で、Cre誘導の準備完了である。この遺伝子Bのノックアウト細胞を用いた骨髄移植実験にてMLL-ENLによる造血幹細胞のがん化における遺伝子Bの役割を解析予定である。

現在までの達成度 (区分)

理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Manipulation of human early T lymphopoiesis by coculture on human bone marrow stromal cells: Potential utility for adoptive immunotherapy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Liu B, Ohishi K, Orito Y, Nakamori Y, Nishikawa H, Ino K, Suzuki K, Matsumoto T, Masuya M, Hamada H, Mineno J, Ono R, Nosaka T,Shiku H, Katayama N.
  • 雑誌名: Exp Hematol 巻: - ページ: -
  • DOI: doi:pii: S0301-472X(12)00595-4. 10.1016/j.exphem.2012.12.001.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cynomolgus monkey induced pluripotent stem cells established by using exogenous genes derived from the same monkey species. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shimozawa N, Ono R, Shimada M, Shibata H, Takahashi I, Inada H, Takada T, Nosaka T, Yasutomi Y.
  • 雑誌名: Differentiation 巻: - ページ: -
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of AMP-activated Protein Kinase Signaling by AFF4, a Member of the AF4 (ALL1-fused Gene from Chromosome 4) Family of Transcription Factors, in Hypothalamic Neurons. (2012)
  • 著者名/発表者名: Komori T, Doi A, Nosaka T,Furuta H, Akamizu T, Kitamura T, Senba E, Morikawa Y.
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 287 ページ: 19985-19996
  • DOI: doi: 10.1074/jbc.M112.367854.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular genotyping of Mycobacterium tuberculosis in Mie Prefecture, Japan, using variable numbers of tandem repeats analysis. (2012)
  • 著者名/発表者名: Nagai Y, Iwade Y, HayakawaE, Nakano M, Sakai T, Tanuma M, Katayama M, Nosaka T, Yamaguchi T.
  • 雑誌名: Jpn J Infect Dis 巻: 65 ページ: 341-344
  • 査読あり
• [雑誌論文] 血液腫瘍モデル動物の現状と展望. (2012)
  • 著者名/発表者名: 野阪哲哉.
  • 雑誌名: In: 金倉譲 編集. 造血器腫瘍学-基礎と臨床の最新研究動向- 日本臨床 巻: 70卷 増刊号2 ページ: 159-164
• [学会発表] MLL fusion genes transform hematopoietic stem cells through an aberrant self-renewal program by Plzf.
  • 著者名/発表者名: Ono R, Masuya M, Nakajima H, Enomoto Y, Miyata E, Nakamura A, Ishii S, SuzukiK, Katayama N, Kitamura T, Nosaka T.
  • 学会等名: 第74回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] パラミクソウイルスの膜融合誘導機構：二分子蛍光相補性（BiFC）法を用いた受容体結合蛋白と膜融合蛋白の相互作用の解析
  • 著者名/発表者名: 鶴留雅人、大塚順平、駒田洋、河野光雄、伊藤守弘、野阪哲哉
  • 学会等名: 第60回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
• [備考] 三重大学大学院医学系研究科感染症制御医学・分子遺伝学分野
  • URL: http://www.medic.mie-u.ac.jp/microbiol/