研究課題
Cre リコンビナーゼとloxP配列を用い、MLL-ENL遺伝子が誘導発現するトランスジェニックマウスを作製した。このトランスジェニックマウスの骨髄細胞からCD34-KSL分画(造血幹細胞)とCD34+KSL分画(造血前駆細胞)を単離し、Cre発現レトロウイルスを感染させて、それらの細胞集団にMLL-ENLを誘導発現させ、colony 継代assayを行ったところ、MLL-ENLは造血幹細胞のみをtransformした。そして、cDNA microarray解析により、造血幹細胞特異的に発現している遺伝子PLZFを同定した。PLZFノックダウン実験では、MLL-ENLが造血幹細胞をtransformする活性が低下した。同様の現象はin vivoの二次移植実験においても観察された。さらに、野生型PLZF遺伝子を強制発現すると、マウス骨髄細胞が不死化され、ポリコーム分子Bmi-1との相互作用が消失する変異体では不死化は起こらなかった。また、PLZFプロモーターを用いたレポーターassayによりMLL-ENL発現がPLZF転写を増強すること、公共データベース上のヒト白血病細胞における遺伝子発現プロファイル解析(GSEA)にてPLZF強発現のMLL関連AMLは造血幹細胞に近いプロファイルを持つことを明らかにした。以上の結果は、MLL-ENLによる造血幹細胞のtransformationにおいて、PLZFが重要な役割を果たしていることを示唆する。さらに、MLL-ENLにより発現が増強する別の造血幹細胞特異的発現遺伝子Bにも着目し、当該遺伝子のコンディショナルノックアウトマウスを作製した。現在Floxedホモの状態で、Cre誘導の準備完了である。この遺伝子Bのノックアウト細胞を用いた骨髄移植実験にてMLL-ENLによる造血幹細胞のがん化における遺伝子Bの役割を解析予定である。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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