| 研究課題/領域番号 |
22390387
|
|---|
| 研究機関 | 長崎大学 |
|---|
研究代表者 |
朝比奈 泉 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30221039)
|
|---|
| 研究分担者 |
小守 壽文 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (00252677)
西村 正宏 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (00294570)
住田 吉慶 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (50456654)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2010-04-01 – 2013-03-31
|
| キーワード | 遺伝子活性化基質 / 遺伝子導入 / BMP4 / 脂肪由来幹細胞 / サケコラーゲン / リン酸カルシウム |
|---|
| 研究概要 |
本年度は遺伝子活性化基質(GAM)の調整を中心に研究を遂行した。
BonadioらのオリジナルによるGAMはコラーゲンを基質としている。そこで、GFPを持つ発現プラスミドに、先にクローニングしたBMP-4を組み込んだものを、牛真皮由来2%アテロコラーゲンに混和し、さらに担体としてのβTCP顆粒を加え、凍結乾燥したGAMを調整した。これをマウス頭蓋部および背部皮下に移植、2，8週後に、共焦点レーザー顕微鏡でGFPの発光を確認するとともに、組織学的に観察を行った。その結果、2，8週とも蛍光および組織学的に骨形成ともに観察できなかった。そこで、カルシウム沈殿法のin vitro遺伝子導入用キットを用い、プラスミド30μgを試薬に溶解後、アテロコラーゲンと混和、凍結乾燥し移植した。その結果、2週後には十分な蛍光が観察できた。移植8週後には僅かではあるが新生骨の形成を認めた。しかし、同様の実験でBMP-2たんぱく質1μgを移植したもの比べ、その骨形成量は10分の1程度であった。より遺伝子の導入効率を上げるために10μmサイズオーダーのαおよびβTCP粉末とプラスミドを混和指導用の移植実験を行ったが、GFPの発現、新生骨形成ともに、カルシウム沈殿法の場合と同程度であった。現在、ナノサイズオーダーのHAを用いた効果を検討中である。
今後、当初の実験計画にあったように鮭皮由来のアテロコラーゲンが入手可能となったので、これについても検討予定である。
さらに、BMP-4を含むGAMに10万個のADSC を播種し、移植実験を行った。GFPの発現は、ADSCを搭載しないGAMに比べ20～30％程度の上昇を認めたが、これがADSCに導入されたのか、ホストの細胞に取り込まれたのか明確ではなかった。また、移植8週後には骨形成を認めたが、ADSCの有無による骨形成量の差異に関しては、現在、精査中である。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
理由
24年度が最終年度であるため、記入しない。
|
| 今後の研究の推進方策 |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
|
