| 研究概要 |
本研究では、成獣中枢神経系において多分化能を持つ細胞であるNG2細胞(コンドロイチン硫酸プロテオグリカンの一種であるNG2を発現する細胞)のin vivoにおける機能を探るため、非侵襲的にNG2細胞を特異的に除去し、残存細胞を形態学的に解析することを目的とする。NG2細胞は、胎生期の放射状グリアの子孫細胞であることから、胎生期の放射状グリアに電気穿孔法を用いてチミジンキナーゼ発現ベクターを導入する。成獣脳で分裂増殖している細胞はほぼ全てがNG2細胞であるため、成獣期にガンシクロビルを投与する事で特異的にNG2細胞を除去する。
本年度は前年度からの継続で、GFPを指標にプロモーター検索を行った。前年度までにubiquitous promoterのCAGプロモーターはNG2細胞で十分な活性を示さないことが判明したので、他のubiquitous promoter(CMV,EF1-alphaなど)を検討した。しかし、これらのubiquitous promterを用いてもNG2細胞で十分な活性を示さなかった。メダカトランスポゾンのTol2システムを用いて高効率でプラスミドをゲノムに組み込むシステムを用いても同様の結果であった。GFP陽性になる細胞はほぼ全てがニューロンであり、グリア系細胞は陰性であった。このことは、NG2細胞を含めたグリア/前駆細胞は、外来プロモーターに対して高いsilencing能力を持っているという一面が明らかになった。
NG2細胞は、ニューロンの過剰興奮に反応して分裂増殖が促進される特徴を持っている。そのため、てんかんモデル動物を用いてNG2細胞の分裂増殖を有為に促進する実験系を確立するために、pentylenetetrazole(PTZ: GABA-A受容体の作動薬)投与によるてんかんモデルマウスの確立を検討した。
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