2012 年度実績報告書

部位特異的組換え酵素群を駆使した、マウス生体における多段階遺伝子発現制御法の確立

研究課題

研究課題/領域番号	22500384
研究機関	東京大学
研究代表者	市瀬広武東京大学, 医科学研究所, 助教 (10313090)
研究分担者	市瀬多恵子東京大学, 医科学研究所, 助教 (00396863) 吉田進昭東京大学, 医科学研究所, 教授 (10250341)
研究期間 (年度)	2010-10-20 – 2013-03-31
キーワード	Cre/loxP / FLP/FRT / Dre/rox / 部位特異的組換え酵素 / マウス
研究概要	本研究では、Cre/loxPシステムを利用したマウスでの時期・組織特異的遺伝子改変技術に加え、新規に開発された部位特異的組換え酵素とその標的配列であるDre/roxシステム、組換え効率の向上化が進められているFLP/FRTシステムをさらに組み合わせることで、マウス生体での高度な遺伝子改変を行う技術基盤の確立を目的とする。平成２４年度においては、以下の実験を実施した。1) 平成２３年度において、内皮細胞系列での発現誘導に有用であり、かつ、Rosa26遺伝子座の代替となることが期待される、CGH4遺伝子座(Ichise et al., 2010)を標的とした、効率の高い遺伝子改変ES細胞の作出系を確立した。その系を用いて、解析対象とする野生型あるいは変異型タンパク質をコードするcDNAおよびIRES配列支配下にあるレポーター遺伝子の発現誘導が可能なコンストラクトを相同組換えによって導入したES細胞クローン４種類を得た。それらのクローンを用いてマウス4系統を作出し、Creドライバーマウスとの交配によってcDNAおよびレポーター遺伝子の発現を誘導した。発現誘導を行なった４種類の野生型あるいは変異型タンパク質の発現パターンをそろえることで、タンパク質間での機能的差異の比較、検討を成功裡に進めることができることを確認した。2) Cre/loxP組換えによって遺伝子発現誘導が可能な導入遺伝子をCGH遺伝子座に導入した前述のES細胞株を用いて、Cre/loxPシステムとは独立して発現誘導が可能である、rox-pA-roxあるいはFRT-pA-FRTのカセット下流に他のcDNAを配置したコンストラクトを、Rosa26遺伝子座に導入した。
現在までの達成度 (区分)	理由 24年度が最終年度であるため、記入しない。
今後の研究の推進方策	24年度が最終年度であるため、記入しない。