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2010 年度 実績報告書

複核金属タンパク質のデノボ設計

研究課題

研究課題/領域番号 22550150
研究機関名古屋工業大学

研究代表者

田中 俊樹  名古屋工業大学, 工学研究科, 教授 (70171775)

キーワードデノボデザイン / コイルドコイル構造 / 金属イオン結合タンパク質 / 金属イオン配位構造
研究概要

スルオキシドジスムターゼを目指したタンパク質設計は、以前に報告した銅イオンを配位した3本鎖ペプチド(IZ-3adH)のアミノ酸配列をもとに行い、3つのα-ヘリックスを短いリンカーでつないだタンパク質(H1)を作成した。H1はCDスペクトル解析からα-ヘリックス構造を取っていた。銅イオンの添加でもCDスペクトルには変化はなかったが、尿素に対する安定性が向上したことから、H1に銅イオンが配位していることが示唆された。等温滴定型カロリメータ(ITC)で銅イオンの結合を調べたところ、1対1で結合していた。EPR測定で銅イナンの配位構造を調べると、銅イオンは平面四配位構造であることがわかった。H1には6つのHis残基があるので、どのHis残基が配位に関与しているかを調べるために、結合に関与していると思われる4つのHis残基だけにしたタンパク質2種類を作成した。これらのタンパク質も銅イオンを配位した。EPRで配位構造を調べるとAパラレル値が13.6mTと12.6mTとなり、銅イオンの配位がかなり歪んでいることがわかった。興味あることに、この値は天然のSODの値(13mT)に近い値であり、SOD中の銅イオンと類似の配位構造を持った銅イオンが作成できた。
パープル銅タンパク質には2つ銅イオンが2つのCysとHis残基と結合し、Cu2S2ダイアモンドクラスクーを形成している。この構造は、ブルー銅タンパク質に存存するCys、His、Hisの三つの残基を2セット組み合わせたものに類似する。そこで以前に作成した設計ブルー銅タンパク質を基本骨格として、先ず4本鎖のヘリックスバンドル構造中に、どのように銅イオンが配位できるかを調べた。設計ブルー銅タンパク質にDFT計算を行いモデル作成した。その結果、銅イオンの入る位置、構造を確認し、また銅イオンの回りに空孔が存在していることがわかった。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2010

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Creation of a Type 1 Blue Copper site within a de Novo coiled-coil Protein Scaffold.2010

    • 著者名/発表者名
      Daigo Shiga
    • 雑誌名

      J.Am.Chem.Soc.

      巻: 132 ページ: 18191-18198

    • 査読あり
  • [学会発表] 4-ヘリックスバンドル内にデノボ設計したタイプ1ブルー銅タンパク質の解析2010

    • 著者名/発表者名
      田中俊樹
    • 学会等名
      第60回錯体化学討論会
    • 発表場所
      大阪国際交流センター(大阪市)
    • 年月日
      2010-09-28
  • [学会発表] De novo設計ブルー銅タンパク質の解析2010

    • 著者名/発表者名
      田中俊樹
    • 学会等名
      第10回タンパク質科学会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター(札幌市)
    • 年月日
      2010-06-18

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公開日: 2012-07-19  

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