細胞内デリバリー制御可能な多機能siRNAの創製と遺伝子サイレンシング

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 22550159
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生体関連化学
• 研究機関: 近畿大学
• 研究代表者: 藤井 政幸 近畿大学, 産業理工学部, 教授 (60199297)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• キーワード: 生体機能関連化学

研究概要

固相フラグメント縮合法により化学合成したsiRNA-NESコンジュゲートによりK562細胞に発現するbcr/abl 遺伝子の発現の発現を200nMにおいて8.3%、50nMにおいて11.6 %に抑制した。また、siRNAと新規ペプチド(Pfect)とのコンプレックスを形成させることにより、市販導入剤と同等以上に効率よく細胞内に導入できることを見出した。siRNA-NESコンジュゲートとPfectとのコンプレックスを用いるとbcr/abl遺伝子を95%以上サイレンシングできることも証明した。この新規ペプチドPfectは全く細胞毒性がなく、PfectとsiRNAのコンプレックスはヌクレアーゼによる分解に対して非常に耐性が強く、その半減期を48時間以上に伸長した。

研究成果

• [雑誌論文] Base-pairing selectivity of a ureido-linked phenyl-2'-deoxycytidine derivative (2012)
  • 著者名/発表者名: Shu-ichi Nakano, Hirohito Oka, Yuuki Uotani, Kazuya Uenishi, Masayuki Fujii and Naoki Sugimoto
  • 雑誌名: Organic & Biomolecular Chemistry 巻: 10 ページ: 9664-9670
• [雑誌論文] Non-toxic delivery of siRNA by amphiphilic peptides and silencing of hTERT (2012)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii and Shutaro Fujiaki
  • 雑誌名: Journal of Peptide Science 巻: 18 ページ: 498-499
• [雑誌論文] Synthesis, Delivery and Gene Silencing of siRNA-NES Conjugates (2011)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii and Irmina Diala
  • 雑誌名: Progress in Drug Delivery Systems 巻: 10 ページ: 91-96
• [雑誌論文] Use of Nucleic Acid Analogs for the Study of Nucleic Acid Interactions (2011)
  • 著者名/発表者名: Shu Ichi Nakano, Masayuki Fujii and Naoki Sugimoto
  • 雑誌名: Journal of Nucleic Acids 巻: 2011 ページ: 1-11
• [雑誌論文] Stacking interaction in the middle and at the end of a DNA helix studied with non-natural nucleotides (2010)
  • 著者名/発表者名: Shu-ichi Nakano, Hirohito Oka, Yuuki Uotani, Kazuya Uenishi, Masayuki Fujii and Naoki Sugimoto
  • 雑誌名: Molecular BioSystems 巻: 6 ページ: 2023-2029
• [雑誌論文] Specific Suppression of bcr/abl mRNA by Chemically Modified siRNAs Targeting b3a2 Transcripts (2010)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii, Irmina Diala, Kazuya Uenishi, Shu-ichi Nakano3 and Naoki Sugimoto
  • 雑誌名: Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 巻: 29 ページ: 548-549
• [雑誌論文] Synthesis of siRNA-Peptide Conjugates by Solid Phase Fragment Condensation (2010)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii and Irmina Diala
  • 雑誌名: Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 巻: 29 ページ: 546-547
• [雑誌論文] Highly Enhanced Silencing Effect by siRNA-Nuclear Export Signal Peptide Conjugates (2010)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii and Irmina Diala
  • 雑誌名: Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 巻: 29 ページ: 544-545
• [雑誌論文] Suppression of Telomerase Activity and Proliferation of Cancer Cell Lines by siRNA Targeting hTERT mRNA (2010)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii and Irmina Diala
  • 雑誌名: Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids 巻: 29 ページ: 542-543
• [学会発表] シグナルペプチドコンジュゲートによるsiRNAの細胞内デリバリーと遺伝子サイレンシング (2013)
  • 著者名/発表者名: 藤明 修太郎・小幡 淳一・藤井 政幸
  • 学会等名: 日本化学会第93春期年会
  • 発表場所: 立命館大学びわこ・くさつキャンパス
  • 年月日: 20130322-25
• [学会発表] siRNA-ペプチド複合体による細胞内デリバリーと遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤井政幸,藤明修太郎,小幡淳一
  • 学会等名: 第30回メディシナルケミストリーシンポジウム
  • 発表場所: タワーホール船堀、東京
  • 年月日: 20121128-30
• [学会発表] Specific Delivery of siRNA by Amphiphilic Peptide-Signal Peptide Conjugates (2012)
  • 著者名/発表者名: Shutaro Fujiaki, Junichi Obata, Masayuki Fujii
  • 学会等名: 第39回国際核酸化学シンポジウム
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 20121115-17
• [学会発表] 核酸とペプチドの機能融合によるbcr/abl遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 小幡淳一・藤明修太郎・藤井政幸
  • 学会等名: 2012年日本化学会西日本大会
  • 発表場所: 佐賀
  • 年月日: 20121110-11
• [学会発表] 新規ハイブリッドペプチドによるsiRNAの細胞導入と遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤明修太郎・小幡淳一・藤井政幸
  • 学会等名: 2012年日本化学会西日本大会
  • 発表場所: 佐賀
  • 年月日: 20121110-11
• [学会発表] 新規小ペプチドによるsiRNAの無毒性細胞導入 (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤井政幸、藤明修太郎、小幡淳一
  • 学会等名: 第49回ペプチド討論会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 20121107-09
• [学会発表] Non-toxic Delivery and Gene Silencing by siRNA-Hybrid Peptide Complex (2012)
  • 著者名/発表者名: Shutaro Fujiaki, Junichi Obata, Masayuki Fujii
  • 学会等名: 8th Annual Meeting of the Oligonucleotide Therapeutics Society
  • 発表場所: Boston, MA.
  • 年月日: 20121028-31
• [学会発表] ペプチド‐siRNA複合体の無毒性細胞導入と遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤明修太郎,小幡淳一,藤井政幸
  • 学会等名: 第2回CSJ化学フェスタ
  • 発表場所: 横浜(慶応大学日吉キャンパス)
  • 年月日: 20121014-17
• [学会発表] 両親媒性ハイブリッドペプチドによるsiRNA特異的無毒性細胞導入 (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤井政幸・藤明修太郎・小幡淳一
  • 学会等名: 第22回アンチセンスシンポジウム
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 20120924-26
• [学会発表] Non-toxic delivery of siRNA by amphiphilic peptides and silencing of hTERT (2012)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Fujii and Shutaro Fujiaki
  • 学会等名: 32nd European Peptide Symposium
  • 発表場所: Athen
  • 年月日: 20120902-07
• [学会発表] NON-TOXIC INTRACELLULAR DELIVERY AND EFFICIENT GENE SILENCING BY FUNCTIONAL FUSION OF SIRNA AND PEPTIDES (2012)
  • 著者名/発表者名: Shutaro Fujiaki and Masayuki Fujii
  • 学会等名: XX International Roundtable on Nucleosides Nucleotides and Nucleic Acids
  • 発表場所: Montreal
  • 年月日: 20120805-09
• [学会発表] 両親媒性ペプチドによるsiRNAの無毒性細胞内デリバリーとhTERTサイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤明修太郎、藤井政幸
  • 学会等名: 日本化学会第92回春季年会
  • 発表場所: 慶応大学日吉キャンパス
  • 年月日: 20120325-28
• [学会発表] ペプチドと核酸の機能融合による細胞内デリバリーと遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤明修太郎、藤井政幸
  • 学会等名: 日本化学会第92回春季年会
  • 発表場所: 慶応大学日吉キャンパス
  • 年月日: 20120325-28
• [学会発表] 塩基性両親媒性ペプチドと二重鎖核酸との相互作用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 西川 勇輝 、増田 春菜、松原 愛、藤井 政幸
  • 学会等名: 第49回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州国際会議場
  • 年月日: 2012-06-30
• [学会発表] 新規両親媒性ペプチドによるsiRNAの無毒性細胞導入とhTERT遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 池辺 貴彦、橋本 武志、藤井 政幸
  • 学会等名: 第49回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州国際会議場
  • 年月日: 2012-06-30
• [学会発表] 核酸とペプチドの機能融合によるbcr/abl遺伝子サイレンシング (2012)
  • 著者名/発表者名: 小幡 淳一、山岡 史典、藤井 政幸
  • 学会等名: 第49回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州国際会議場
  • 年月日: 2012-06-30
• [学会発表] 新規ハイブリッドペプチドによるsiRNAの細胞導入 (2012)
  • 著者名/発表者名: 藤明修太郎、行武 陽介、藤井 政幸
  • 学会等名: 第49回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州国際会議場
  • 年月日: 2012-06-30
• [学会発表] siRNA-NESコンジュゲートの合成、デリバリー、遺伝子サイレンシング (2011)
  • 著者名/発表者名: 藤井政幸,Irmina Diala
  • 学会等名: 第20回DDSカンファランス
  • 発表場所: 静岡
  • 年月日: 20110916-17
• [産業財産権] 細胞への核酸導入方法、核酸キャリア及び核酸複合体 (2011)
  • 発明者名: 藤井政幸
  • 権利者名: (財)北九州産業学術推進機構
  • 産業財産権番号: PCT出願,PCT/JP2011/065612
  • 出願年月日: 2011-07-07
  • 外国