研究課題
我々は、複数のプロモーターを持つアロマターゼ遺伝子を具体例に、クロマチン構造とプロモーターの転写活性の相関を解析している。異なるプロモーターからアロマターゼを発現する複数のヒト細胞株を用いた解析により、これまでにヒストンH3K27の修飾と転写の強い関わりを示唆する結果を得ている。更に昨年度は、研究分担者が開発したクロマチン構造解析法であるSEVENS法を用いて、アロマターゼ遺伝子座全域の解析を行い、転写活性とクロマチンのオープンの度合いに相関があることを明らかにした。そこで今年度は、エピジェネティク・マーカーと構造の相互関係を確認するために、遺伝子座全域に渡ってヒストンH3K27のアセチル化とメチル化の局在を調べ全域の構造のデータと比較した。クロマチン免疫沈降法を用いて、130kbに渡るアロマターゼ遺伝子座全域について、ヒストンH3K27の修飾を検討した。転写にポジティブなマークであるヒストンH3K27アセチル化のピークは、使われるプロモーター領域に存在した。一方、転写にネガティブなマークであるヒストンH3K27トリメチル化は、一部の細胞株で、使用していないプロモーター及びその上流にピークが局在していた。これは、ヒストンH3K27トリメチル化によりプロモーターが選択的に転写抑制されている可能性を示唆している。これを検証するため、ヒストンH3K27トリメチル化酵素の阻害剤を添加し、RT-PCRで使われているプロモーターを確認したところ、通常使われないプロモーターからの転写が確認できた。更に、阻害剤添加により使われるようになったプロモーター領域では、ヒストンH3K27トリメチル化が減少し、クロマチンがオープンになる傾向が認められた。以上の結果より、ヒストンH3K27トリメチル化がアロマターゼ遺伝子のプロモーター選択性と活性に関わっていることが明らかになった。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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J. Immunol.
巻: 189 ページ: 4237-4246
10.4049/jimmunol.1201476
