| 研究概要 |
一部の非ヒストンタンパクの分子機能がヒストンメチル化酵素によるリジン残基のメチル化修飾により制御を受けることが知られている。p300/CBP-associated factor (PCAF)は多くの細胞機能にかかわるアセチル化酵素である。申請者は,PCAFがメチル化酵素Set9の基質となることを見出し速報として報告した("Multiple lysine methylation of PCAF by Set9 methyltransferase." BBRC 2009)。本研究ではこの成果をさらに発展させ,リジン残基メチル化によるPCAFの分子機能変化ならびに生物学的意義を解明する。
本年度は,PCAFがP53分子をアセチル化することから,PCAFのメチル化がそのアセチル化活性にどう影響するかを検討した。U20S細胞をSET9に対するsiRNAでノックダウンするとメチル化PCAFが減少する。この時,P53分子K320およびヒストンH3K9のアセチル化を解析したところ,ともにアセチル化の程度が減少していた。さらに,PCAFのメチル化部位を変異(KをRに置換)させた変異PCAFを強制発現し,アドリアマイシンにてP53分子を誘導した際のアセチル化P53 (K320)をウエスタンブロットにより解析したところ,変異PCAFを強制発現した細胞においてはP53 (K320)のアセチル化が低下していた。以上の結果は,メチル化PCAFがP53 (K320)のアセチル化を正に制御している可能性を示唆している。一方,PCAFの細胞内安定性やユビキチン活性はメチル化によって左右されなかった。
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