| 研究概要 |
ネコのウイルス感染症のうち,ネコ伝染性腹膜炎(FIP)はワクチン開発が未だ成功しておらず,効果的な治療法も確立されていない疾患で,一度発症すると致死的な経過をたどる。このため,ウイルス複製制御因子を同定・解析し,病原性発現機構を明らかにすることが切望されている。
申請者は,免疫抑制剤サイクロスポリンA(CsA)がFIPウイルス(FIPV)のゲノム複製と転写を強力に阻害することを発見した。前年度において,CsAと結合する細胞内サイクロフィリン(Cyp)がFIPVの増殖を促進することを明らかにし,FIPVのN蛋白質との共免疫沈降実験の結果からCypB蛋白質と特異的に結合することがわかった。このため,CypB遺伝子発現のノックダウン細胞を作成し,FIPVを感染させた結果,FIPVのウイルス複製を有意に阻害することを認めた。さらにこのノックダウン細胞にCypB遺伝子を導入することで遺伝子発現を回復したリバータント細胞を作成しFIPウイルスを感染させた結果,ウェスタンブロット法,リアルタイムPCR法,ウイルス感染価測定法,いずれにおいてもウイルス増殖効率が回復した。これらの結果から,CypB蛋白質がFIPVの増殖に関与していることが明らかとなった。今後,CypBの遺伝子欠失変異体を作成し,どの領域がウイルス増殖に関与しているか,さらに解析が必要である。
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