自己抗体抗原の網羅的高感度検出によるBSE生前血清診断法の開発

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22580353
• 研究機関: 酪農学園大学
• 研究代表者: 横田 愽 酪農学園大学, 獣医学部, 教授 (90137414)
• 研究分担者: 今岡 進 関西学院大学, 理工学部, 教授 (60145795) ; 鈴木 一由 酪農学園大学, 獣医学部, 准教授 (30339296)
• キーワード: BSE / GFAP / 生前診断 / 血清診断 / 自己抗体 / 抗原検出

研究概要

平成22年度計画と成果
1) 自己抗体の高感度検出
イギリスウエッブリッジ獣医学研究所から分与していただいたBSE50頭分の血清を一次抗体とし、二次抗体(ウシIgGに蛍光ラベルした)を用いたウエスタンブロッティング法により、自己抗体の網羅的高感度検出を行い、TOF-MSを用いPMF解析およびMS/MS解析した。其の結果、これまで検出できたGFAP以外に抗原蛋白質として、Neurofilament,とPorinとKynesinを検出した。いずれもGFAPと同様に、神経特異的タンパク質がBSE牛の脳内神経細胞の崩壊によって血液中に逸脱し自己抗体が形成されていることが確かめられた。今後新たに見出したタンパク質の自己抗体を検出することでBSE確定診断に有用なデーターを得ることができる。
2) GFAP蛋白質の高感度検出
本研究では、予め網羅的に抗体を検出しその抗原を特定することで、次に血液中からその抗原蛋白質つまりターゲットを絞り込むことが出来る。よって、高感度で確実に検出することができる。そこで、溶液中蛋白質をトリプシン消化し、GFAPのみの特異的ペプチドの四重極タンデム質量分析機による検出定量する方法を試みた。其の結果、GFAP消化ペプチドのうち4種のフラグメントを検出出来た。よって今後は、生体試料を用いて同様の試験を行い、このペプチドが検出出来るかどうか試験する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Placental Transfer of Conjugated Bisphenol A and Subsequent Reactivation in the Rat fetus (2010)
  • 著者名/発表者名: Miyu Nishikawa, Hidetomo Iwano, Risa Yanagisawa, Nanako Koike, Hiroki Inoue, Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: Environ.Health Perspect. 巻: 118 ページ: 1196-1203
  • 査読あり
• [雑誌論文] Protective Effect of High-Mobility Group Box 1 Blockade on Acute Liver Failure in Rats :(HMGB 1 Blockade for Rat Acute Liver Failure).Y. (2010)
  • 著者名/発表者名: Takano K, Shinoda M, Tanabe M, Miyasho T, Yamada S, Ono S, Masugi Y, Suda K, Fukunaga K, Hayashida T, Hibi T, Obara H, Takeuchi H, Kawachi S, Kawasako K, Okamoto M, Yokota H, Maruyama I, Kitagawa
  • 雑誌名: Shock 巻: 34 ページ: 573-579
  • 査読あり
• [雑誌論文] Biochemical and immunohistochemical characterization of the amyloid in canine amyloid-producing odontogenic tumor (2010)
  • 著者名/発表者名: Hirayama K, Miyasho T, Ohmachi T, Watanabe T, Yokota H, Taniyama H
  • 雑誌名: Vet Pathol. 巻: 47 ページ: 915-922
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spherical sulfated cellulose adsorbs high-mobility-group box chromosomal protein 1 in vitro and in vivo. (2010)
  • 著者名/発表者名: Suda K, Takeuchi H, Hagiwara T, Miyasho T, Yamada S, Inoue T, Okamoto M, Wada N, Saikawa Y, Fukunaga K, Hashimoto S, Yokota H, Maruyama I, Kitagawa Y.
  • 雑誌名: ASAIO J. 巻: 56 ページ: 210-214
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neutrophil elastase inhibitor improves survival of rats with clinically relevant sepsis. (2010)
  • 著者名/発表者名: Suda K, Takeuchi H, Hagiwara T, Miyasho T, Okamoto M, Kawasako K, Yamada S, Suganuma K, Wada N, Saikawa Y, Fukunaga K, Funakoshi Y, Hashimoto S, Yokota H, Maruyama I, Ishizaka A, Kitagawa Y.
  • 雑誌名: Shock 巻: 33 ページ: 526-531
  • 査読あり
• [学会発表] 臓器灌流モデルを用いたビスフェノールA体内動態の解明 (2010)
  • 著者名/発表者名: 井上博紀, 西川美宇, 佐野千枝, 太田有耶, 櫻田泰樹, 岩野英知, 横田博
  • 学会等名: 環境ホルモン学会
  • 発表場所: 東京大学
  • 年月日: 2010-12-17
• [学会発表] メタボローム解析によるビスフェノールAの妊娠期暴露影響の新規探索 (2010)
  • 著者名/発表者名: 岩野英知, 西川美宇, 森田安奈, 柳沢梨沙, 封馬澄人, 井上博紀, 横田博
  • 学会等名: 環境ホルモン学会
  • 発表場所: 東京大学
  • 年月日: 2010-12-17