リン酸親和性水晶発振子マイクロバランス法を用いた リン酸化生体分子の解析

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 22590037
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 木下 英司 広島大学, 大学院・医歯薬保健学研究院, 准教授 (80304418)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• キーワード: リン酸化 / 水晶発振子マイクロバランス / QCM / バイオセンサー / フォスタグ / 分子認識 / 蛋白質 / 分析化学

研究概要

本研究では,研究代表者らが独自に開発したリン酸モノエステルジアニオンを特異的に捕捉する機能性分子(以下,フォスタグ)を水晶発振子マイクロバランス(QCM)法に適用させた。まずは,フォスタグを QCM チップ上に固定化したリン酸親和性バイオセンサーチップを新たに開発した。そして,この新規センサーチップを用いることで,リン酸化蛋白質や DNA のようなリン酸化生体分子の高感度検出に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Sandwich assay for phosphorylation of protein multiplexes by using antibodies and Phos-tag (2013)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem
  • DOI: DOI:10.1016/j.ab.2013.03.029
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based magnetic-bead method for rapid and selective separation of phosphorylated biomolecules (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsunehiro, M., Meki, Y., Matsuoka, K., Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T
  • 雑誌名: J. Chromatogr ページ: 86-94
  • DOI: DOI:10.1016/j.jchromb.2013.02.039
  • 査読あり
• [雑誌論文] A laborsaving, timesaving, and more reliable strategy for separation of low-molecular-mass phosphoproteins in Phos-tag affinity electrophoresis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T
  • 雑誌名: Int. J. Chem 巻: 4 ページ: 1-8
  • DOI: DOI:10.5539/ijc.v4n5p1
  • 査読あり
• [雑誌論文] EF-1α and mitochondrial ATP synthase ・ chain: Alteration of their expression in encystment-induced Colpoda cucullus (2012)
  • 著者名/発表者名: Sogame, Y., Kojima, K., Takeshita, T.,Eiji Kinoshita, and Matsuoka, T
  • 雑誌名: J. Eukaryot. Microbiol 巻: 59 ページ: 401-406
  • DOI: DOI:10.1111/j.1550-7408.2012.00628.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] リン酸化プロテオミクスのための Phos-tag テクノロジー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 雑誌名: 分析化学 巻: 61 ページ: 469-487
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/article/bunsekikagaku/61/6/61_469/_article/-char/ja/ ; http://ir.lib.hiroshima-u.ac.jp/00033871
  • 査読あり
• [雑誌論文] Protein phosphorylation in encystment-induced Colpoda cucullus: Localization and identification of phosphoproteins. (2012)
  • 著者名/発表者名: Sogame, Y., Kojima, K., Takeshita, T., Fujiwara, S., Miyata, S., Eiji Kinoshita, and Matsuoka, T
  • 雑誌名: FEMS Microbiol. Lett 巻: 331 ページ: 128-135
  • DOI: DOI:10.1111/j.1574-6968.2012.02560.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Highly sensitive detection of protein phosphorylation by using improved Phos-tag Biotin (2012)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Sugiyama, Y., Fukada, Y., Ozeki, T., and Koike, T
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 12 ページ: 932-937
  • DOI: DOI:10.1002/pmic.201100639
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation and identification of four distinct serine-phosphorylation states of ovalbumin by Phos-tag affinity electrophoresis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T
  • 雑誌名: Electrophoresis 巻: 3 3 ページ: 849-855
  • DOI: DOI:10.1002/elps.201100518
  • 査読あり
• [雑誌論文] プロトコール集 フォスタグテクノロジーを用いたリン酸化タンパク質解析法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子,木下英司,小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: s51-s75
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/browse/sbk/56/Suppl_2/_contents/-char/ja/
  • 査読あり
• [雑誌論文] 今後の展望2 蛍光性Phos-tag を用いたタンパク質リン酸化反応の解析法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,多幾山敬,宗村雅男,小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: s45-s49
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/browse/sbk/56/Suppl_2/_contents/-char/ja/
  • 査読あり
• [雑誌論文] 今後の展望1 中性条件で泳動を行う改良型 Phos-tag SDS-PAGE を用いたリン酸化タンパク質解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下恵美子,木下英司,小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: s41-s44
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/browse/sbk/56/Suppl_2/_contents/-char/ja/
  • 査読あり
• [雑誌論文] フォスタグケミストリー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 56 ページ: s3-s7
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/browse/sbk/56/Suppl_2/_contents/-char/ja/
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phos-tag SDS-PAGE systems for phosphorylation profiling of proteins with a wide range of molecular masses under neutral pH conditions (2012)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 1 2 ページ: 192-202
  • DOI: DOI:10.1002/pmic.201100524
  • 査読あり
• [雑誌論文] Possible involvement of cAMP and protein phosphorylation in the cell signaling pathway for resting cyst formation of ciliated protozoan Colpoda cucullus (2011)
  • 著者名/発表者名: Sogame, Y., Asami, H., Eiji Kinoshita, and Matsuoka, T
  • 雑誌名: Acta Protozool 巻: 50 ページ: 71-79
  • URL: http://www.eko.uj.edu.pl/ap/index.php?option=com_docman&task=cat_view&gid=42&Itemid=27
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ca2+-dependent in vivo protein phosphorylation and encystment induction in the ciliated protozoan Colpoda cucullus (2011)
  • 著者名/発表者名: Sogame, Y., Eiji Kinoshita, and Matsuoka, T
  • 雑誌名: Eur. J. Protistol 巻: 4 7 ページ: 208-213
  • DOI: DOI:org/10.1016/j.ejop.2011.02.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the kinase reaction of a substrate peptide (2011)
  • 著者名/発表者名: Somura, M., Takiyama, K., Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Methods 巻: 3 ページ: 1303-1309
  • DOI: DOI:10.1039/C1AY05016H
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel phosphate-affinity bead with immobilized Phos-tag for separation and enrichment of phosphopeptides and phosphoproteins (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Yamada, A., Inoue, C., Eiji Kinoshita, and Koike, T
  • 雑誌名: J. Integrated OMICS 巻: 1 ページ: 157-169
  • DOI: DOI:10.5584/jiomics.v1i1.46
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improved Phos-tag SDS-PAGE under neutral pH conditions for advanced protein phosphorylation profiling (2011)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita and Kinoshita-Kikuta, E
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 11 ページ: 319-323
  • DOI: DOI:10.1002/pmic.201000472
  • 査読あり
• [雑誌論文] Zinc(II)-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for detection of mutations in short Ade/Thy-rich DNA fragments (2011)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, Harada, N., and Koike, T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: 408 ページ: 348-350
  • DOI: DOI:10.1016/j.ab.2010.09.003
  • URL: http://ir.lib.hiroshima-u.ac.jp/00030873
  • 査読あり
• [学会発表] Highly sensitive imaging of protein phosphorylation by Phos-tag technology (2013)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita
  • 学会等名: 1st International Symposium on Protein Modifications in Pathogenic Dysregulation of Signaling
  • 発表場所: 東大医科研講堂,東京
  • 年月日: 2013-02-01
• [学会発表] Phos-tag 技術が拓くタンパク質リン酸化研究の新たな潮流 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: マリンメッセ福岡,福岡市
  • 年月日: 2012-12-16
• [学会発表] SuperSep Phos-tag プレキャストゲル:迅速,高効率,かつ,高精度なリン酸化シグナル伝達分子の分離検出法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: マリンメッセ福岡,福岡市
  • 年月日: 2012-12-11
• [学会発表] Phos-tag 技術によって新たにできるようになったこと (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 新薬理学セミナー 2012
  • 発表場所: 熊本大学薬学部宮本記念館,熊本市(招待講演)
  • 年月日: 2012-11-24
• [学会発表] Phos-tag SDS-PAGE systems for protein phosphorylation profiling under neutral pH conditions (2012)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita,Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T
  • 学会等名: HUPO 2012 11th Annual World Congress
  • 発表場所: Hynes Convention Center, Boston, MI, USA
  • 年月日: 2012-09-12
• [学会発表] リン酸化タンパク質解析のためのフォスタグテクノロジー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第63回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター,宜野湾市
  • 年月日: 2012-08-20
• [学会発表] 改良型Phos-tag Biotin の開発とリン酸化プロテオミクスへの応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会 2012 年大会
  • 発表場所: 日本科学未来館,東京
  • 年月日: 2012-07-26
• [学会発表] Phos-tag アフィニティ電気泳動の開発と改良～リン酸化タンパク質の分析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第62回日本電気泳動学会シンポジウム
  • 発表場所: 慶応義塾大学薬学部,東京
  • 年月日: 2012-05-11
• [学会発表] リン酸化生体分子解析のための Phos-tag テクノロジー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第610回 九州大学生医研セミナー
  • 発表場所: 九州大学生医研,福岡市(招待講演)
  • 年月日: 2012-02-23
• [学会発表] Phos-tag がもたらす蛋白質リン酸化解析のブレークスルー (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会バイオインダストリーセミナー
  • 発表場所: パシフィコ横浜,横浜市(招待講演)
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] 改良型 Phos-tag Biotin の開発とその応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第62回日本電気泳動学会
  • 発表場所: 横浜市開港記念会館,横浜市
  • 年月日: 2011-11-13
• [学会発表] Phos-tag 親和電気泳動法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第62回日本電気泳動学会
  • 発表場所: 横浜市開港記念会館,横浜市
  • 年月日: 2011-11-12
• [学会発表] Phos-tag によるタンパク質リン酸化修飾の高感度検出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第5回QCM研究会
  • 発表場所: 東京會館,東京都千代田区
  • 年月日: 2011-10-14
• [学会発表] リン酸化プロテオミクスに向けた Phos-tag テクノロジーの奥義 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第63回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 東京農工大学,東京都小金井市
  • 年月日: 2011-09-28
• [学会発表] Phos-tag を用いた分子イメージングとリン酸化シグナル研究 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館,京都市
  • 年月日: 2011-09-24
• [学会発表] 改良型Phos-tag Biotin を用いたペプチドマイクロアレイ解析による蛋白質リン酸化反応プロファイリング (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会 2011 年大会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ,新潟市
  • 年月日: 2011-07-29
• [学会発表] Phos-tag を用いたリン酸化タンパク質解析の新展開 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 日本農芸化学会 2011 年大会ランチョンセミナー
  • 発表場所: 京都女子大学,京都市(招待講演)
  • 年月日: 2011-03-26
• [学会発表] Phos-tag がもたらすリン酸化シグナル研究のブレークスルー (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 酵母細胞プロジェクト研究センター春期シンポジウム
  • 発表場所: 広島大学大学院・先端物質科学研究科,東広島市
  • 年月日: 2011-03-11
• [学会発表] Phos-tag テクノロジーが拓く生命科学研究の新展開 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第354回生命科学セミナー
  • 発表場所: 広島大学総合科学部,東広島市
  • 年月日: 2011-02-23
• [学会発表] リン酸基認識素子としての二核亜鉛錯体とオミクス解析技術への応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 第4回日本化学会東海支部 若手研究者フォーラム
  • 発表場所: 名古屋市立大学薬学部,名古屋市
  • 年月日: 2011-01-22
• [学会発表] Improved Phos-tag Biotin for advanced profiling of protein phosphorylation (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学学会大会(BMB2010)
  • 発表場所: 神戸国際展示場,神戸市
  • 年月日: 2010-12-09
• [学会発表] Improved Phos-tag Biotin for highly sensitive detection of protein (2010)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会 2010 年大会
  • 発表場所: 東京ベイホテル東急,東京
  • 年月日: 2010-07-27
• [図書] Phos-tag affinity electrophoresis for protein kinase profiling (2012)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T
  • 総ページ数: 13-34
  • 出版者: Springer
• [図書] Phos-tag ゲルによるリン酸化タンパク質の分離・同定法.臨床プロテオミクス～バイオマーカー探索から個別化医療へ (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 総ページ数: 271-274
  • 出版者: 金原出版
• [図書] Gel-based methods using DNA-binding zinc(II) complexes for the detection of DNA mutations. in DNA Replication and Mutation (2012)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E and Koike, T
  • 総ページ数: 91-111
  • 出版者: Nova Science Publishers
• [図書] 実験医学 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 総ページ数: 686-692
  • 出版者: 羊土社
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [備考]
  • URL: http://shushoku-signal.com/soshiki/kobo/18kinoshita.html