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RNA干渉(RNAi)は、短い2本鎖RNA(siRNA)を直接細胞内へ導入する、又はsiRNAを発現するベクター(RNAiベクター)を細胞内へ導入することで標的遺伝子の発現を特異的に抑制する手法である。RNAiは遺伝子の機能解析に利用されているが、白血病細胞や神経細胞のような遺伝子導入効率が低い細胞ではRNAiの利用が困難である。
一般に、細胞内に導入されたプラスミドベクターは、細胞質を経由し、核内に到達して遺伝子を発現する。ところが、細胞質から核内への移行効率は非常に低く、導入されたプラスミドベクターの大部分は細胞質に留まる。そのため、従来遺伝子導入効率が低いとされる細胞でも、実際は相当量のベクターが細胞内に導入されると考えられる。そこで、細胞質内で直接siRNAを発現できるベクターは、遺伝子導入効率が低い細胞の機能解析に利用できるRNAiベクターと成り得る。以上のことから、本研究では細胞質内で直接siRNAを発現できるRNAiベクターを開発することを目的とする。
本年度はT7 RNAポリメラーゼ発現プラスミドベクターpCMV-T7RNAP及びT7 RNAポリメラーゼによってがん抑制遺伝子p53に対するsiRNA発現が誘導されるプラスミドベクターpT7-RNAi-p53を作製した。また、pT7-RNAi-p53の対照としてpT7-RNAi-L及びpT7-RNAi-LacZも作製した。続いて、当研究室においてHeLa細胞及びA549細胞の培養系を立ち上げた。今後、細胞培養系を用いて新規RNAiベクターシステムが機能するのかを確認する予定である。
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