| 研究概要 |
平成23年度に開発した糖化ローダミン（２個のアミノ基に各１個のグルコースが付加したジグルコシルローダミン110, Glu-Rho）は、本研究で開発を目的としている“強蛍光性、安定かつ生体成分との相互作用の少ない色素”として有用であろうことが示唆された。本年は、単糖のグルコースの代わりに二糖のマルトースを付加させた糖化ローダミン（ジマルトシル-ローダミン110, Mal-Rho）を合成し、その特性を比較検討し、ラベル化反応へ適用した。
【1】色素としての特性 蛍光波長はGlu-Rhoと同様に、ローダミン110より25nm程度長波長側にシフトしている。親水性は、逆相カラムに対する保持を、比較検討した。数種類の移動相を用いた結果、保持時間はどの移動相を用いた場合にも Mal-Rho < Glu-Rho << Rhodamine110 < TAMRA となった。
【2】ラベル化への適用 Mal-RhoおよびGlu-Rhoには、カルボキシル基が存在するので、縮合剤の存在下にアミノ基と反応し、アミドを形成することが可能と考えられる。まず、イソロイシンをモデルにアミノ酸のラベル化を検討した。
逆相HPLCに適用したところ、両試薬ともイソロイシンに対応する1本の蛍光ピークを与え、蛍光ラベル化に適用できることを確認した。蛍光強度に大きな差はみられないが、保持時間はMal-Rho 誘導体が、Glu-Rho誘導体の約半分であり、２倍の糖＝２倍の水酸基の差が保持時間の差となっていることが予想される。分析対象、試料などに応じて使い分けることが可能と考える。その他、ペプチドACTH、タンパク質cytochromeのラベル化にも適用可能であった。
今回開発したMal-RhoおよびGlu-Rho は、“強蛍光性、安定かつ生体成分との相互作用の少ない色素”として有用性は極めて高いと思われる
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