| 研究概要 |
【目的】当研究室では、ラット培養細胞へ長期間(10週間以上)カドミウム（Cd）投与すると、細胞の形態学的変化が起こり、その細胞より抽出したDNAではメチル化異常が起こっていた。これらの結果はCdによる発がんメカニズムにDNAのメチル化異常が関係していることを示唆するものと考えられる。そこで今回の研究では、形態転換した細胞より抽出したRNAとコントロールのRNAを用いて、cDNA microarray法によりCdの標的遺伝子を同定することを目的に検討を行った。
【方法】細胞：ラット肝臓培養細胞（TRL1215）を用いた。細胞に2.5μM塩化Cdを10週間曝露後、無Cd培養液で４週間培養した。細胞回収後、総RNAを抽出しマイクロアレー用試料とした。マイクロアレー：NCBI(National Center for Biotechnology Information)に公表されているラットの塩基配列のうち、3,779種選択しオリゴDNAプローブ配列を設計した(1遺伝子につき1プローブ)。 設計したプローブ配列をCombi Matrix社製のB3-マイクロアレー作製機に入力して、ラットマイクロアレーを作製した。
【結果および考察】各曝露Rat Culture Cellに対するDNAマイクロアレー解析では、発現変動が統計学的に有意であり、さらにコントロールの発現量に対する曝露群の発現量の比（EXP/CTL）が2倍以上または1/2以下という基準により、発現変動遺伝子を検出した。その結果、2.5µM Cd曝露により、76種類の遺伝子に有意な発現変動がみられた。そのうち、Nrf2によって遺伝子発現が調節されている解毒酵素(NQO1, GSTp1, HO1)の遺伝子発現量は、 Cd曝露によって有意に増加していた。その他、細胞周期、がん遺伝子、がん抑制遺伝子の発現に有意な差がみられた。
|
