| 研究概要 |
【目的】種々の重金属は，発がんの原因物質であることが知られている．一方，マトリックスメタロプロテアーゼ2（MMP2）は活性中心に金属を有する分泌タンパク質であり，がんの進展および浸潤に関与している．そこで我々は，重金属による発がんメカニズムの一部にMMP2が関与している可能性を検討してきた．その結果，in vitro実験系では，Znが細胞培養液のMMP2分泌活性を増加させ，CdおよびCrは減少させた．一方，ex vivo実験系（酵素源として細胞培養液）ではこれらの金属はMMP2活性に影響を与えなかった．そこで今回，MMP2 の細胞内タンパク質発現量およびmRNA発現量に対するZn, Cd, Crの影響を調査し，細胞内MMP2が細胞外へ分泌されるどの過程に影響しているのか検討した．
【方法】使用重金属：ZnSO4, CdCl2, K2CrO4 (6価クロム)．細胞：マウス由来線維芽培養細胞を使用した．細胞培養液に種々の重金属を添加し24時間培養後，培養液を回収した．細胞はTRIzol試薬を用いてtotal RNAを抽出し，RT-PCRによりMMP2 mRNA発現量を測定した．また，Lysis Bufferを用いて細胞内タンパク質を回収した．Gelatin zymography：サンプルを10 % zymogram gel（0.1 % gelatin入り）にて泳動し，zymogram キット（TEFCO社）を用いてMMP2活性を測定した。
【結果および考察】細胞内MMP2活性を測定した結果，CdおよびCrは細胞内MMP2活性を増加させ，Znは減少させた。次に，MMP2 mRNAについて検討した結果，Zn, Cd, CrはMMP2 mRNAレベルに影響を与えなかった．したがって，CdおよびCrはMMP2の細胞外への分泌量を減少させることで，細胞内MMP2が増加し，Znは細胞外への分泌を亢進することで，細胞内MMP2レベルを減少させる可能性が示唆された．
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