ＳＴ２遺伝子多型による構造変化と病気との関連

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22590289
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 富永 眞一 自治医科大学, 医学部, 教授 (70155571)
• 研究分担者: 早川 盛禎 自治医科大学, 医学部, 講師 (30326847) ; 為本 浩至 自治医科大学, 医学部, 准教授 (90292630)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• キーワード: ST2 / IL-33 / シグナル伝達

研究概要

ヒトST2遺伝子産物には、細胞外領域に相当する78番目のアミノ酸がEまたはAになる2つのタイプがある。このアミノ酸変異は、リガンドであるIL-33の結合領域に相当する。本研究では、78番目のアミノ酸の違いが、（1）IL-33とST2の結合の強さに影響するか、（2）IL-33シグナル伝達系に影響するかについて調べた。
（1）分泌型のST2の全長（A78タイプとE78タイプ）にV5エピトープタグとヒスチジンタグをつけたタンパク質をHEK293細胞で発現させニッケルカラムでST2を精製した。IL-33はT7タグとヒスチジンタグ付きで大腸菌で発現し、同じく精製した。IL-33をCM5チップに固定した場合は、アナライトのST2をはがしてチップを再生する過程に問題があり、正確な計測ができなかった。アナライトをはがす操作なしに計測できる装置をもつ医科学研究所の津本教授の研究室に測定を依頼した。E78タイプがA78タイプよりKdが約3倍大きいという結果であった。
（2）E78タイプとA78タイプをコードするヒトST2L発現ベクターをマウス胸腺腫由来細胞にトランスフェクションした後、抗生物質を用いてST2L発現細胞のクローンを選抜した。ヒトIL-33でST2L発現細胞を刺激した後、経時的なMAPキナーゼとNF-κBの活性化をウエスタンブロット法により検出した。リン酸化されたJNK、p38、ERK、およびリン酸化されたNF-κBp65は、E78タイプとA78タイプのいずれにおいても、刺激15分後から検出され、その後徐々に活性化は減弱した。しかしながら、E78タイプとA78タイプにおけるIL-33シグナル伝達経路の活性化に明確な違いは認められなかった。これらの結果から、78番目のアミノ酸変異は、IL-33シグナル伝達系に影響を及ぼさないことが示唆された。

現在までの達成度 (区分)

理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Presence of a novel exon 2E encoding a putative transmembrane protein in human IL-33 gene. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tominaga, S., Hayakawa, M., Tsuda, H., Ohta, S., and Yanagisawa, K.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 430 ページ: 969-974
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2012.12.050
  • 査読あり
• [雑誌論文] YM-175 induces apoptosis of human native monocyte-lineage cells via inhibition of prenylation. (2012)
  • 著者名/発表者名: Miwa, A., Takezako, N., Hayakawa, H., Hayakawa, M., Tominaga, S., and Yanagisawa, K.
  • 雑誌名: Am. J. Hematol 巻: 87 ページ: 1084-1088
  • DOI: DOI:10.1002/ajh.23328
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of IL-33 expression by IFN-γ and tumor necrosis factor-α in normal human epidermal keratinocytes. (2012)
  • 著者名/発表者名: Meephansan, J., Tsuda, H., Komine, M., Tominaga, S., and Ohtsuki, M
  • 雑誌名: J. Invest. Dermatol 巻: 132 ページ: 2593-2600
  • DOI: DOI:10.1038/jid.2012.185
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sustained elevation of interleukin-33 in sera and synovial fluids from patients with rheumatoid arthritis non-responsive to anti-tumor necrosis factor: possible association with persistent IL-1β signaling and a poor clinical response. (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsuyama, Y. et al.
  • 雑誌名: Rheumatol. Int. 巻: 32 ページ: 1397-1401
  • DOI: 10.1007/s00296-011-1854-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ultraviolet B irradiation induces the expression of IL-33 mRNA and protein in normal human epidermal keratinocytes. (2012)
  • 著者名/発表者名: Meephansan, J., Komine, M., Tsuda, H., Tominaga, S., and Ohtsuki, M.
  • 雑誌名: J. Dermatol. Sci. 巻: 65 ページ: 72-74
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2011.10.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] Soluble ST2 protein inhibits LPS stimulation on monocyte-derived dendritic cells. (2012)
  • 著者名/発表者名: Nagata, A., Takezako, N., Tamemoto, H., Ohto-Ozaki, H., Ohta, S., Tominaga, S., and Yanagisawa, K.
  • 雑誌名: Cell. Mol. Immunol. 巻: 9 ページ: 399-409
  • DOI: 10.1038/cmi.2012.29
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel splice variants of IL-33: Differential expression in normal and transformed cells. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsuda, H., Komine, M., Karakawa, M., Etoh, T., Tominaga, S., and Ohtsuki, M.
  • 雑誌名: J. Invest. Dermatol. 巻: 132 ページ: 2661-2664
  • DOI: 10.1038/jid.2012.180
  • 査読あり
• [学会発表] ST2遺伝子の選択的スプライシングにおけるトランス因子の解析。 (2012)
  • 著者名/発表者名: 鴨下信彦、為本浩至、早川盛禎、富永眞一
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121214-20121216
• [学会発表] IL-33は核内でケラチノサイトの細胞増殖に関与している。 (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsuda, H., Komine, M., Oshio, T., Tominaga, S., Ohtsuki, M.
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121211-20121214
• [学会発表] IL-33受容体ST2Lの細胞外ドメイン放出。 (2012)
  • 著者名/発表者名: Tamemoto, H., Kamoshita, N., Kashiwada, M., Hayakawa, M., Ozaki, H., Tominaga, S.
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121211-20121214
• [学会発表] ヒト単球由来樹状細胞に対する分泌型ST2タンパク質の作用。 (2012)
  • 著者名/発表者名: Nagata, A., Ohta, S., Tominaga, S., Yanagisawa, K.
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121211-20121214
• [学会発表] IL-17 up regulates IL-33 expression in keratinocytes; negative feedback loop in psoriatic epidermis. (2012)
  • 著者名/発表者名: Meephansan, J., Tsuda, H., Komine, M., Karakawa, M., Tominaga, S., Ohtsuki, M.
  • 学会等名: The 42nd Annual ESDR (European Society for Dermatological Research) Meeting.
  • 発表場所: Venice, Italy
  • 年月日: 20120907-20120910
• [学会発表] Regulation of IL-33 expression by interferon-gamma and tumor necrosis factor-alpha in normal human epidermal keratinocytes. (2012)
  • 著者名/発表者名: Meephansan, J., Tsuda, H., Komine, M., Karakawa, M., Tominaga, S., Ohtsuki, M.
  • 学会等名: Annual Meeting of the Society for Investigative Dermatology.
  • 発表場所: Raleigh, North Carolina, USA
  • 年月日: 20120509-20120512