研究課題
大腸菌でDNAの組換えに関わると考えられているdbpA(DNA-binding protein A)の発現が、ヒトにおいて活性化リンパ球の指標となるCD30陽性細胞の染色態度とリンパ組織において類似していることを見出し、さらにCD30陽性の悪性リンパ腫に高頻度に発現していることを見出した。上記の結果を踏まえ、dbpAの機能を正常のリンパ球ならびに悪性リンパ腫において解析した。正常のリンパ球では、二重染色にてCD20(Bリンパ球),CD3(Tリンパ球)のいずれの細胞系譜にも一部発現がみられ、系譜特異性はみられなかった。またCD30陽性細胞の一部にdbpAの発現がみられた。Hodgkinリンパ腫細胞株のひとつであるL428にはdbpAの発現はみられない。そこでFlag-dbpAと同時にGFPをそれぞれ独立に発現するプラスミドを構築し、dbpA安定細胞株の樹立を試みた。エレクトロポレーションにて導入し、GFP陽性細胞をFACSにてスクリーニングすることでL428-dbpA発現安定細胞株(以下L428-Flag-dbpA)の樹立に成功した。この際、GFPのみを発現するコントロール細胞株(L428-Mock)も同時に得た。まずdbpAの発現が増殖に与える効果を検討した。L428-Flag-dbpAではL428-Mockに比して増殖能が高くなる傾向を得た。次にdbpAの結合因子同定を目的として、抗Flag抗体を用いて免疫沈降にてスクリーニングを行った。その結果、Flag-dbpAと結合する因子としてRNA helicase Aを同定した。RNA helicase AはNFκBのひとつであるp65との結合が報告されており、RNA helicase Aを介したNFκBシグナルへの関与が示唆された。
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