癌プロテアーゼのアナフィラトキシンＣ５ａ産生による癌自己活性化経路解析と治療応用

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22590363
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 今村 隆寿 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 准教授 (20176499)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• キーワード: C5a / 癌 / 増殖 / 転移 / フューリン / プロテアーゼ / 自己活性化 / 産生

研究概要

補体5因子aフラグメント(C5a)の癌細胞運動性亢進作用以外の作用を明らかにするために、細胞増殖促進作用を調べた。C5a受容体(C5aR)発現癌細胞(HuCCT1/C5aR)は、C5a存在下で培養すると24時間後にはC5a 10nMと100 nMで各々1.4と1.7倍に増殖した。この作用はC5aR非発現癌細胞(HuCCT1/mock)ではみられず、C5aRの拮抗剤10μMで完全に抑制された。さらに、癌細胞をpropidium iodideで蛍光核染色しフローサイトメトリーで細胞周期の変化を解析すると、C5a刺激によりG2/M期の細胞が増加しており且つアポトーシス細胞が減少していた。また、C5a刺激後癌細胞をヌードマウス尾静脈から注射し6週間後に肺への転移を調べると、C5a刺激したHuCCT1/C5aR 細胞はC5a刺激しなかった場合の3倍、C5a刺激したHuCCT1/mock細胞の5倍の転移巣を形成した。これらの結果から、C5aが癌細胞の増殖と転移を亢進することが明らかになった。癌細胞によるC5a産生を調べると、C5aR発現の有無にかかわらず解析した胆管癌、大腸癌株のすべてが精製C5と生理的にC5aが存在する血漿からC5aを産生した。C5添加した培養液で癌細胞を培養した上清はC5a抗体で抑制される癌浸潤促進作用があった。この産生作用は培養上清にはみられず、セリンプロテアーゼ阻害剤のみで抑制された。細胞膜プロテアーゼのフューリンはC5からC5aを産生し、癌細胞のC5a産生作用はフューリン阻害剤で抑制された。以上より、癌細胞膜上のフューリン様プロテアーゼによってC5aを産生して浸潤能などを亢進する癌自己活性化機構の存在が示唆された。

現在までの達成度 (区分)

理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Inhibition of Aeromonas sobria serine protease (ASP) by α2-macroglobulin. (2012)
  • 著者名/発表者名: Murakami, Y., Wada, Y., Kobayashi, H., Irie, A., Hasegawa, M., Yamanaka, H., Okamoto, K., Eto, M., & Imamura, T.
  • 雑誌名: Biological Chemistry 巻: 393 ページ: 1193-1200
  • DOI: 10.1515/hsz-2012-0117
  • 査読あり
• [雑誌論文] The tail nick augments Aeromonas sobria serine protease (ASP) activity in plasma through retarding inhibition by α2-macroglobulin. (2012)
  • 著者名/発表者名: Murakami, Y., Wada, Y., Kobayashi, H., Hasegawa, M., Okamoto, K., Eto, M., & Imamura, T.
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: 6 ページ: 586
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2012.08.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] Severe bleeding tendency caused by excessive fibrinolysis with disseminated intravascular coagulation in a prostate cancer patient: a case report. (2012)
  • 著者名/発表者名: Wada, Y., Uchiba, M., Kawano, Y., Kai, N., Takahashi, W., Honda, J., Tanoue, K., Maeda, Y., Murakami, Y., Eto, M., & Imamura, T.
  • 雑誌名: Journal of Medical Case Reports 巻: 6 ページ: 378
  • DOI: 10.1186/1752-1947-6-378
  • 査読あり
• [雑誌論文] 凝固反応：感染・炎症の病態と制御-;細菌と好中球プロテアーゼ- (2012)
  • 著者名/発表者名: 今村隆寿
  • 雑誌名: 日本血栓止血学会誌 巻: 23 ページ: 268-285
• [雑誌論文] 凝固炎症反応関連の病理学 (2012)
  • 著者名/発表者名: 今村隆寿
  • 雑誌名: Coagulation & Inflammation 巻: 6 ページ: 6-14
• [雑誌論文] 進行性腎盂尿管癌の臨床において手術に役立つ腎盂尿管の解剖(Gerota筋膜) (2012)
  • 著者名/発表者名: 和田孝浩, 今村隆寿, 高橋渡, 河野吉昭, 本多次朗, 田上憲一郎, 仲西寿朗, 谷川史城, 前田喜寛, 中村圭輔, 江藤正俊, 桑原朋広
  • 雑誌名: 泌尿器外科 巻: 25 ページ: 667-672
• [学会発表] 転移性腎細胞癌におけるC5a受容体の発現及び生物学的意義について (2013)
  • 著者名/発表者名: 前田喜寛、和田孝浩、河野吉昭、菊池健、高橋渡、本多次朗、田上憲一郎、仲西寿朗、谷川史城、中村圭輔、矢津田旬二、今村隆寿、江藤正俊
  • 学会等名: 第22回泌尿器科分子・細胞研究会
  • 発表場所: 高知：ホテル日航高知旭ロイヤル
  • 年月日: 20130308-20130309
• [学会発表] Anaphylatoxin C5a enhances human cancer cell motility and invasiveness via aberrantly expressed C5a-receptor (CD88). (2012)
  • 著者名/発表者名: Imamura, T., Murakami, Y., Wada, Y., Kawano, Y., & Nitta, H.
  • 学会等名: 2012 Annual Meeting of The American Society for Cell Biology
  • 発表場所: The Moscone Center, San Francisco, USA
  • 年月日: 20121215-20121219
• [学会発表] Urine of AKI patients promotes metanephrotic cell growth and recovery of renal function after ischemic-reperfusion injury in mouse. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kitamoto, Y., Kitamura, H., Sugai, H., Taguma, Y., Imamura, T., & Yorinaga, H.
  • 学会等名: 2012 Annual Meeting of The American Society for Cell Biology
  • 発表場所: The Moscone Center, San Francisco, USA
  • 年月日: 20121215-20121219
• [学会発表] AKI患者尿中の腎傷害回復促進活性. (2012)
  • 著者名/発表者名: 北本康則, 北村,洋, 菅井久子, 田熊淑男, 今村隆寿, 駒場秀春, 頼仲方一
  • 学会等名: 第59回日本臨床検査医学会学術総会
  • 発表場所: 京都：京都国際会館
  • 年月日: 20121129-20121202
• [学会発表] 黄色ブドウ球菌プロテアーゼ・スタホパインのフィブリノゲンとコラーゲン分解作用. (2012)
  • 著者名/発表者名: 大林武久, 今村隆寿, 入江厚, 村上洋嗣, 篠原正徳
  • 学会等名: 第57回日本口腔外科学会総会・学術大会
  • 発表場所: 横浜：パシフィコ横浜
  • 年月日: 20121019-20121021
• [学会発表] Frequent Expression of C5aR in Metastatic Renal Cell Carcinoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda, Y.,, Wada, Y., Kawano, Y., Kikuchi, K., Takahashi, W., Honda, J., Nakanishi, J., Yatsuda, J., Murakami, Y., Imamura, T., & Eto, M.
  • 学会等名: 32nd SIU Congress 2012
  • 発表場所: 福岡市：福岡国際会議場
  • 年月日: 20120930-20121004
• [学会発表] Aberrant expression of C5aR in metastatic renal cell carcinoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda, Y.,, Wada, Y., Kawano, Y., Kikuchi, K., Takahashi, W., Honda, J., Nakanishi, J., Yatsuda, J., Murakami, Y., Imamura, T., & Eto, M.
  • 学会等名: The 29th Japan-Korea Urological Congress
  • 発表場所: 鹿児島市：城山観光ホテル
  • 年月日: 20120914-20120915
• [学会発表] 血漿中での細菌プロテアーゼ-α2-マクログロブリン複合体形成の測定-Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS)- (2012)
  • 著者名/発表者名: 今村隆寿, 村上洋嗣, 小林秀丈, 長谷川慎
  • 学会等名: 第17回日本病態プロテアーゼ学会学術集会
  • 発表場所: 浜松市：オークラアクトシティホテル浜松
  • 年月日: 20120810-20120811
• [学会発表] AKI患者尿中の腎傷害回復促進活性―胎仔腎器官培養と動物モデルを用いた解析. (2012)
  • 著者名/発表者名: 北本康則, 北村洋, 菅井久子, 田熊淑男, 今村隆寿, 頼仲方一
  • 学会等名: 第55回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 横浜：パシフィコ横浜
  • 年月日: 20120601-20120603
• [学会発表] Abberant expression C5aR in metastatic renal cell carcinoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeda, Y., Wada Y., Kawano, Y., Kikuchi, K., Takahashi, W., Honda, J., Nakanishi, J., Imamura, T., & Eto, M.
  • 学会等名: 107th American Urological Association (AUA) Annual Meeting
  • 発表場所: Georgia World Congress Center, Atlanta, USA.
  • 年月日: 20120519-20120523
• [学会発表] Enhancement of human cancer cell migration and invasion by anaphylatoxin C5a vvia aberrantly expressed C5a-receptor. (2012)
  • 著者名/発表者名: Nitta, H., Imamura, T., & Baba, H.
  • 学会等名: Digestive Disease Week (DDW)
  • 発表場所: San Diego Convention Center, San Diego, USA.
  • 年月日: 20120519-20120522
• [学会発表] 癌細胞のアナフィラトキシンC5a受容体発現とC5aによる癌細胞運動性活性化および浸潤亢進. (2012)
  • 著者名/発表者名: 今村隆寿，村上洋嗣, 新田英利
  • 学会等名: 第101回日本病理学会総会
  • 発表場所: 東京：京王プラザホテル
  • 年月日: 20120426-20120428