RBM15によるmRNA核外輸送機構に関する研究

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22590418
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 浦西 宏明 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 研究員 (40363923)
• 研究分担者: 岡本 尚 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (40146600)
• キーワード: RBM15 / mRNA輸送 / 転写後調節 / ウイルス

研究概要

RBM15によるmRNA輸送および転写後調節機構について以下の研究を行った。カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)ではウイルス蛋白ORF57がイントロンレス遺伝子ORF59の発現を転写後レベルで制御しているが、この転写後調節機構におけるRBM15の役割を検討した。RBM15を細胞に強発現させることによりORF59蛋白およびmRNAの発現が増強した。またRBM15をノックダウンすることによりORF59の発現が抑制されたことから、ORF59発現における内在性RBM15の重要性が明らかになった。またRBM15はORF57と細胞核内で共在し、共にnuclear speckle様の染色形態を示した。さらにORF57はRBM15のSPOC領域を含むC末端領域に直接結合することが共免疫沈降法およびpull down法により確認された。ORF57はKSHVの主に複製後期でその発現量が増加するが、この時ORF57はRBM15と相互作用することにより細胞質内のORF59-mRNAを増加させ、ORF59蛋白の発現を増強することを明らかにした。(J. Virology 2011)
他方、RBM15およびホモログ蛋白OTT3によるマウスレトロエレメントRTE-mRNA発現機構についても現在解析を進めているところである。RBM15およびOTT3は共にRTE-mRNA依存性のレポーター遺伝子活性を増強し、またGST-RBM15およびGST-OTT3蛋白はGel shift法においてin vitroで作成したRTE-mRNAに選択的に結合することが確認された。またRBM15をノックダウンすることにより、RTE依存性のレポーター遺伝子発現は抑制されたことから、RTE-mRNAの発現における内在性RBM15の重要性が確認された。

研究成果

• [雑誌論文] Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus ORF57 Interacts with Cellular RNA Export Cofactors RBM15 and OTT3 To Promote Expression of Viral ORF59 (2011)
  • 著者名/発表者名: Vladimir Majerciak, Hiroaki Uranishi, Michael Kruhlak, Guy R.Pilkington, Maria Julia Massimelli, Jenifer Bear, George N.Pavlakis, Barbara K.Felber, Zhi-Ming Zheng
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 85 ページ: 1528-1540
  • 査読あり
• [雑誌論文] The RNA Transport Element of the Murine musD Retrotransposon Requires Long-range Intramolecular Interactions for Function (2010)
  • 著者名/発表者名: Michal Legiewicz, Andrei S.Zolotukhin, Guy R.Pilkington, Katarzyna J.Purzycka, Michelle Mitchell, Hiroaki Uranishi, Jenifer Bear, George N.Pavlakis, Stuart F.J.Le Grice, Barbara K.Felber
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 巻: 285 ページ: 42097-42104
  • 査読あり