肥満と活性酸素:メタボリック症候群と動脈硬化の病態に対するSODの関与

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 22590563
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 衛生学
• 研究機関: 兵庫医療大学
• 研究代表者: 大河原 知水 兵庫医療大学, 薬学部, 教授 (50330452)
• 研究分担者: 是金 敦子 兵庫医療大学, 薬学部, 助教 (80461169)
• 連携研究者: 藤原 範子 兵庫医科大学, 医学部, 准教授 (10368532) ; 鈴木 敬一郎 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (70221322)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• キーワード: 予防医学

研究概要

組み換え型ヒトEC-SODの精製系を作製した。恒常的発現細胞HECY6-7をクローニングし、473mLの培養上清から3段階のクロマトグラフィー操作により103μgの高純度のヒトEC-SODを精製することができた。精製酵素のN-結合型糖鎖を外し、酵素活性とヘパリン親和性を調べたところ、ともに増加していた。マウスEC-SODのヘパリン親和性ドメインに二種類の変異を導入した(Glu237Lysおよび236KERKKRRRESEC=>KERKKRRRESECKEKKRRRESEC)結果、ともにヘパリン親和性が野生型に較べて増加していた。N-結合型糖鎖の結合位置を付け替えた二つの変異体(N121Q/Q207NandN121Q/S234N)では、ともにヘパリンに対する親和性が野生型に較べ変化していた。これらの結果から、EC-SODの糖鎖修飾は酵素の機能と局在を決める上で重要であり、抗酸化酵素薬として実用化する上で、EC-SODのN-結合型糖鎖の変換の重要性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Structural switching of Cu,Zn-superoxide dismutases at loop VI: insights from the crystal structure of 2-mercaptoethanol-modified enzyme. (2012)
  • 著者名/発表者名: Ihara K, Fujiwara N, Yamaguchi Y, Torigoe H, Wakatsuki S, Taniguchi N, Suzuki K.
  • 雑誌名: Biosci Rep 巻: 32(6) ページ: 539-48
  • DOI: doi:10.1042/BSR20120029.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alterations in renal iron metabolism caused by a copper/zinc-superoxide dismutase deficiency. (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoshihara D, Fujiwara N, Kato S, Sakiyama H, Eguchi H, Suzuki K.
  • 雑誌名: Free Radic Res 巻: 46(6) ページ: 750-7
  • DOI: doi:10.3109/10715762.2012.673223.
  • 査読あり
• [雑誌論文] N-Glycosylation profiling of recombinant mouse extracellular superoxide dismutase produced in Chinese hamster ovary cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Korekane H, Korekane A, Yamaguchi Y, Kato M, Miyamoto Y, Matsumoto A, Hasegawa T, Suzuki K, Taniguchi N, Ookawara T.
  • 雑誌名: Glycoconj J 巻: (3-4) ページ: 183-96
  • DOI: doi:10.1007/s10719-011-9333-6.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Voluntary exercise attenuates obesity-associated inflammation through ghrelin expressed in macrophages. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kizaki T, Maegawa T, Sakurai T, Ogasawara JE, Ookawara T, Oh-ishi S, Izawa T, Haga S, Ohno H.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 413(3) ページ: 454-9
  • DOI: doi:10.1016/j.bbrc.2011.08.117.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hydrogen peroxide enhances LPS-induced nitric oxide production via the expression of interferon beta in BV-2 microglial cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Eguchi H, Fujiwara N, Sakiyama H, Yoshihara D, Suzuki K.
  • 雑誌名: Neurosci Lett 巻: 494(1) ページ: 29-33
  • DOI: doi: 10.1016/j.neulet.2011.02.047.
  • 査読あり