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血液中のシアン(CN)を錯体化合物とし、タンデム質量分析(MS-MS)を用いて分析する方法を開発した。
シアン中毒はCN化合物やある種の食品の摂取、燃焼により発生したCNガスの吸引等によりひきおこされる。今までの検出法では血液を酸性とすることによりCNをHCNガスとして分離したり、血液を除蛋白後に誘導体化して、GC-MSやLC-MS等、MS(質量分析)1回のみで検出していた。またそれらの方法では、血液を0.4-2mL使用し、分離と検出に40分を要していた。我々はより信頼性のあるMS-MSで、より少量の血液でより短時間に検出する方法を開発した。
血液5μLを採取し、50μLの水で溶血し、1 Mtetramethyl ammonium hydroxideを5μL添加混合し、pH10とする。10^<-4>MのNaAuCl_4を2μL添加し、methyl isobutyl ketone(MIBK)を75μL添加混合し、遠心する。MIBK層10μLをMS-MS装置ヘカラムを使用することなく直接注入し、m/z249のAu(CN)_2→m/z26のCNへの脱離反応をMS-MSで測定した。
血液中CNの定量範囲は10^<-7>-10^<-5>Mであり、4種類の中毒死解剖症例および正常人の血液中濃度は以下であった。1.練炭中毒者(n=6):(1.18±0.43)×10^<-7>M、2.家屋火災の焼死者(n=21)):(2.81±3.33)×10^<-5>M、3.NaCN中毒者(n=1):(1.17±0.04)×10^<-4>M、4.NaN_3中毒者(n=1):(3.02±0.21)×10^<-6>M、5.非喫煙正常人(n=6)):(2.74±0.93)×10^<-7>M。焼死者の内、2名のCNは正常人と同レベルであったが、COHb濃度は50%以上であった。また焼死者3名のCOHb濃度は20%以下であったが、CNは正常人の10倍レベルであった。NaN_3摂取者の血液中CNについては1989年以降5例において検討が行われ、3例では存在する、2例では存在しないと報告されている。本例では正常人の10倍レベルのCNの存在がMS-MSによりはじめて確認された。
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