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2011 年度 実績報告書

グレリン活性を増加させる漢方成分の探索

研究課題

研究課題/領域番号 22590676
研究機関北海道大学

研究代表者

武田 宏司  北海道大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (60261294)

キーワードグレリン / GOAT / 漢方薬 / 六君子湯
研究概要

申請者はシスプラチン投与にともなう食欲不振に対して、六君子湯およびその成分が5HT2受容体に拮抗することにより血中アシルグレリンを増加させ、食欲不振を改善することを報告してきた。しかしながら、血中アシルグレリン/デスアシルグレリン比が上昇する機序は不明のままであった。本研究は、六君子湯およびその成分がアシル基転移酵素(GOAT)の活性を修飾する可能性を検証することを目的とする。
平成23年度は、ストレスがグレリン産生系に与える影響の検討を行った。6週齢のC57BL/6J雄性マウスを用い、グループ飼育から個別飼育に切り替え、新奇環境ストレスを負荷した。隔離後、血清コルチコステロンは増加、血漿グレリンは低下した。六君子湯は隔離マウスの血漿グレリンを増加させ、摂食量の低下を抑制した。また、その作用はグレリン受容体拮抗剤により抑制された。社会的隔離による食欲不振に対し、六君子湯はグレリン分泌を促進する事により食欲を改善させると考えられた。
また同年度は、ヒトcDNAライブラリーより、特異的プライマーを用いたPCR法にて、ヒトpreproghrelinおよびGOAT遺伝子をクローニングし、両遺伝子を同時に発現させるpCMV-Ghr-I-RES―GOAT(CMVプロモーター配列および抗生物質neomycinに対する耐性遺伝子を有する)を構築した。次に、構築したpCMV-Ghr-IRES-GOATをリポフェクション法によりヒト胎児腎臓HEK293細胞に遺伝子導入した。その後、培地中に抗生物質G418を添加して選択を行い、耐性細胞のクローンを複数単離した(293-Ghr/GOAT細胞)。293-Ghr/GOAT細胞のcell lysateを用いてアシルグレリンを検出できることを、アシルグレリン特異的ELISA法を用いて確認した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

安定的にヒトpreproghrelinおよびGOAT遺伝子を発現する293-Ghr/GOAT細胞の樹立に時間がかかったため。

今後の研究の推進方策

平成24年度は、安定的にヒトpreproghrelinおよびGOAT遺伝子を発現する293-Ghr/GOAT細胞にn-オクタン酸を0.01%添加して培養後、細胞を回収する。回収した細胞のcell lysateを調製し、オクタン酸の添加によるアシルグレリンの産生量の変動をアシルグレリンに対する特異的ELISA法により測定する。この系に、50%DMSOに溶解した40種類の六君子湯成分を最終100μMになるように添加し、同様にELISAによりアシルグレリン産生量を測定する。成分を添加しない対照群のアシルグレリン産生量と比較することで、六君子湯成分のGOAT活性に対する影響を明らかにする。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2011

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (1件)

  • [雑誌論文] Decreased plasma ghrelin contributes to anorexia following novelty stress2011

    • 著者名/発表者名
      Saegusa Y, Takeda H, Muto S, Nakagawa K, Ohnishi S, Sadakane C, Nahata M, Hattori T, Asaka M
    • 雑誌名

      Am J Physiol Endocrinol Metab

      巻: 301 ページ: E685-696

    • DOI

      10.1152/ajpendo.00121.2011

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 10-Gingerol, a component of rikkunshito, improves cisplatin-induced anorexia by inhibiting acylated ghrelin degradation2011

    • 著者名/発表者名
      Sadakane C, Muto S, Nakagawa K, Ohnishi S, Saegusa Y, Nahata M, Hattori T, Asaka M, Takeda H
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 412 ページ: 506-511

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2011.08.002

    • 査読あり
  • [学会発表] 六君子湯は社会的隔離による食欲不振を改善する2011

    • 著者名/発表者名
      武田宏司, 武藤修一, 大西俊介
    • 学会等名
      第97回日本消化器病学会総会
    • 発表場所
      京王プラザホテル(東京都)
    • 年月日
      2011-05-14

URL: 

公開日: 2013-06-26  

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