| 研究概要 |
これまでの研究で高密度オリゴヌクレオチドアレイを用いた肝細胞癌の遺伝子量的異常の網羅的解析よりわれわれはHedgehogシグナルの異常が肝細胞癌の発生・進展に深く関与している可能性を見出していたため、そのシグナル構成因子につき検討を行うこととした。まず、シグナル構成因子の肝細胞癌細胞株での発現をQuantitative real-time RT-PCRとWestern blottingで検討したところLigandであるSonic hedgehog,受容体であるSmoothend、Patched、転写因子であるGlioma-associated oncogene homolog 1はすべて発現している一方、シグナルを負に制御する受容体Hedgehog interacting proteinの発現低下がみられた。HHIPの発現低下のメカニズムを探索するため、Sodium bisulfite sequencingおよびmethylation-specific PCR (MSP)によるDNAメチル化解析を行った。その結果、HHIP mRNAの発現低下がみられた細胞の一部ではDNAメチル化がみられており、それらの細胞株は脱メチル化剤処理することでmRNA発現回復がみられたことから、mRNA発現低下の機序の一つとしてDNAメチル化が考えられた。また、HHIP DNAメチル化はないがmRNA発現低下がみられた細胞株は、これまでの高密度オリゴヌクレオチドアレイを用いた検討でHHIPのLoss of heterozygosityがあることがわかっている。従って、肝細胞癌ではHedgehogシグナルの負の構成因子HHIPのgenomicあるいはepigenomicな異常により遺伝子不活化がおこり、Hedgehogシグナルの異常活性化がおこり肝発癌・進展に関与することが明らかとなった.
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