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筋萎縮性側索硬化症(ALS)の神経細胞で異常局在・凝集するRNA結合蛋白であるTDP-43による神経突起(軸索および樹状突起)へのRNA運搬機能およびその標的RNAを解析するため、今年度はまずマウス胎児大脳皮質初代神経細胞を用いた純度の高い神経突起分画の調製法を確立した。マウス胎児より大脳皮質を取り出して細胞を分離し、底部に小孔を持つchamber insert上に播種して培養、chamber insert底部下面より神経突起を回収してtotal RNAを精製した。このようにして得られた神経突起分画ではRT-PCRにて種々の細胞骨格のmRNAはみられるものの核蛋白のmRNAは検出されず、核成分の混入はみられないと考えられた。この初代神経細胞培養系でTDP-43 shRNA配列を挿入したレンチウイルスベクターを用いてTDP-43の発現を抑制したところ、時間経過とともに細胞数の減少、神経突起伸長の抑制傾向がみられ、TDP-43が神経突起の機能維持に重要であり、その破綻がALS発症に関与する可能性が考えられた。今後神経突起でTDP-43により運搬される標的mRNAを同定してその機能解析を行うことにより、ALSにおける神経変性の時空間的な分子機構を明らかにしていく予定である。
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