| 研究概要 |
神経細胞におけるβセクレターゼ(BACE1)の脂質ラフト移行メカニズムおよび脂質ラフトにおけるBACE1機能制御メカニズムを解明するための研究,およびBACE1活性の阻害作用を持つ低分子化合物の探索研究を実施し,以下のような成果が得られた。(i)BACE1野生型(WT),パルミチル化欠損変異体(CA4)の組換えアデノウイルスを作製して,ラット大脳皮質初代培養神経細胞に発現させた場合,WTに比べ,CA4では脂質ラフト局在が著しく低下したが,どちらもアミロイドβ蛋白(Aβ)分泌を同程度増加させた。βアミロイド前駆体蛋白(APP)をBACE1と共に過剰発現させた場合でも,WT,CA4は同様にAβ分泌を増加させた。従って,神経細胞において,BACE1の脂質ラフト局在はパルミチル化により制御されること,APPのβ切断は脂質ラフト外で主におこることが示唆された。また,BACE1の細胞外切断にもパルミチル化が関与することを示唆するデータが得られた。(ii)LRP(Lipoprotein receptor-related protein)野生型,ノックアウト(KO)細胞にAPP,BACE1を過剰発現させる系を用いた検討の結果,BACE1,APPの発現及びAβ産生の制御にLRPが関わることが示唆された。(iii)膜蛋白LRRTM3がBACE1発現調節作用を持つことを示唆するデータを得た。(iv)C末部にHisタグを付加したBACE1細胞外ドメイン(sBACE1)を発現するCHO細胞を材料として,sBACE1を生化学的に精製することに成功した。この精製蛋白と化合物アレイを反応させるスクリーニング実験を行い,複数個の陽性化合物が得られた。今後,このスクリーニングを継続し,BACE1阻害作用を持つ低分子化合物の同定を進める予定である。
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