研究課題
本研究では、視床下部弓状核のAGRPニューロンにおける3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 (PDK1)-Foxo1経路の標的遺伝子を同定することを目的としている。そのためのニューロン特異的遺伝子発現解析の方法として、Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP)法を利用することを選択した 。すなわち、EGFPとlarge-subunit ribosomal protein L10aのN末端との融合蛋白をAGRPニューロン特 異的に発現させるトランスジェニックマウスを作製し、抗EGFP抗体による免疫沈降を利用し、AGRPニ ューロン特異的な遺伝子発現解析を網羅的に行うことを計画した。HEK293培養細胞において、 EGFP-L10aを一過性発現させ、抗EGFP抗体にて免疫沈降することにより、RNAを回収しうることを確 認した。現在、EGFP-L10aを組織特異的に発現させるtransgeneの構築を終了した。さらにこのtransgene が、Cre recombinaseにより、発現が誘導されることを細胞レベルで確認した。並行して、組織特異的 EGFP-L10a発現トランスジェニックマウスを樹立するため、transgeneの injectionを行い、2ラインの陽性マウスを得ることができた。今後、このマウスとニューロン特異的Cre recombinase発現トランスジェニックマウスを掛け合わせることにより、実際にTRAP法を試み、ニューロン特異的の遺伝子発現解析を行う予定である。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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