研究課題
平成22年以降、日本でも多剤耐性アシネトバクター属菌(MDRA)による院内感染が発生するようになった。しかし、MDRAのカルバペネム耐性に関与する主要耐性因子であるクラスDに属するカルバペネム分解型βラクタマーゼ(CHDL)の検出法は確立されていない。本研究の目的の一つはこのCHDLの検出法を確立することにある。平成23年までは、ポリクローナル抗体を用いたイムノクロマト法による検出法の構築を試みたが、特異度に問題があることが判明したため、モノクローナル抗体を作成することにした。平成23年度、対象とした全てのCHDLに対する抗体作成と検出システムの構築が終了した。日本ではCHDL産生株の分離頻度が低いため、米国、英国、オーストラリア、オランダ、シンガポール、韓国、イタリアおよびフランスの研究者にその評価を依頼した。本年度中には、その評価結果を集計し、論文で公表する予定である。もう一つの目的であるOXA-23の酵素学的パラメータは、平成22年度にほぼ取得することができた。しかし現在は、その反応機構を詳しく解明するために、さらに詳細なパラメータの取得を試みている。一方で、本酵素の結晶化が難航していることも事実である。一方、OXA-40に関しては良好な結晶が得られており、詳細な構造の解析を実施する予定である。平成24年度は、OXA-40の詳細な酵素学的パラメータを取得し、解析された構造をもとにその反応機構の詳細を理解する予定である。
3: やや遅れている
OXA-23に対する主要な基質に対する酵素学的パラメータの取得は平成22年度に取得し終わったが、さらに詳細なパラメータの取得に時間を要した。さらに、現時点までOXA-23の結晶化の条件が見つかっていない。OXA-40の検討に関してはほぼ予定通り進行している。また、ポリクローナル抗体を用いたイムノクロマト法による検出系は非特異反応が解消できず、モノクローナル抗体を用いて検出する方法を構築することにした。
本研究は臨床応用可能な耐性菌検出システムの開発と酵素学的・生化学的研究を包括的に同時に推進することを最大の特徴としている。現在、耐性菌検出システムの開発はほぼ終了し、現在その評価を試みている。さらに、本システムの評価が終了したら、早急に本邦における耐性菌の現状を把握するためのサーベイランスを実施する。一方、基礎研究に関しては予定より時間を要してはいる。その理由として酵素反応が複雑で且つ野生型酵素の精製が困難だったことが挙げられる。現在、OXA-23およびOXA-40の酵素学的解析に進展が見られている。今後さらに詳細な解析を実施することで、これまで把握することができなかったCHDLの反応機構解明が進むと確信している。
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