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申請者はヒトiPS細胞からヒト神経幹細胞を作成し、神経幹細胞に癌遺伝子であるN-mycを恒常的に発現させることで、正常細胞である神経幹細胞が腫瘍化し、神経芽細胞腫様に変化する可能性の有無について検討している。この成果は、正常細胞が腫瘍化するモデルをin vitroで再現することとなり、腫瘍発生メカニズムを解明する知見となると考えている。今年度において、連携研究者の岡野らが確立したヒトiPs細胞由来神経幹細胞を作製する技術(未発表)を習得し、本培養系を確立した。得られた神経幹細胞をニューロスフェアと呼ばれる浮遊細胞の塊として培養を維持した。継代培養を繰り返し、神経幹細胞の分化能の変化について、細胞染色を用いて解析した。ニューロスフェアをマトリゲルコートによって接着性を獲得したカバーガラス上に移し培養を開始した。特定の栄養因子(塩基性線維芽細胞増殖因子FGF2および白血病抑制因子LIF)を除去することによって1週間かけて分化誘導を行った。10世代以上の継代培養ののちも、神経幹細胞の分化能は神経のみに分化する状態であった。マウス神経幹細胞では2世代目の神経幹細胞がすでにグリア細胞への分化能を獲得しているのと比べ、ヒト神経幹細胞では分化能の変化に長期間必要とすることが明らかになった。様々な発生段階のin vitroモデルとなる神経幹細胞を準備するため、神経幹細胞の分化能の変化を促進する培養法を確立する必要があると考えている。また、N-myc遺伝子を神経幹細胞へ遺伝子導入するためのベクターについてはすでに準備状態にあり、細胞が準備でき次第、遺伝子導入実験を開始する予定である。
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