| 研究課題/領域番号 |
22591462
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
石黒 秀行 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (10363920)
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| 研究分担者 |
塩崎 みどり 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助教 (90531004)
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| キーワード | 食道癌 / Wntシグナル / TCF4 / ベータカテニン |
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| 研究概要 |
1.microRNAのプロモーターアッセイ
検索したmicroRNAのうち、TCFのbinding site CTTTGAAもしくはCTTTGAT CTTTGTA、CTTTGTTをプロモーター領域にもつmicroRNAは、miR-20b、miR129-1、miR138-1、miR15b、miR16、miR17-5p、miR20a、mi21、miR103、miR106a、miR107、miR134などが候補となった。
いずれもプロモーター領域から、約1500bpまでの間に、上記のbinding siteをもつmicroRNAである。mir-129においては、食道癌の腫瘍部での発現が正常粘膜部の4倍以上であると共に、生存曲線においてmir-129高発現群では有意に予後不良であり、多変量解析においても独立した予後因子であることが確認されているが、同microRNAの上流にもTCF7L2結合部位となりうる配列が確認されている。まずはmicroRNAの上流でTCF7L2がpromoterとして本当に作用しているかをプロモーターアッセイにて確認を順次進めていく計画である。しかしながら、プロモーターベクター作製に難渋しており、現時点で有意な結果は得られていない。
2.食道癌細胞株におけるWntシグナルの抑制実験
TCF4siRNAの配列によって、細胞株によって抑制効果はまちまちで、細胞死誘導できるまでにはいたらなかった。この原因についてsiRNAのロットの違いを考え、またTCF4そのものを完全ブロックするのは困難であろうと考えている。ベータカテニンそのものをsiでブロックし、一部の食道癌細胞株に細胞死を誘導できた。今後食道癌におけるWntシグナル機構の関与を解明できるものと考える。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
プロモーターアッセイ用のベクター作製には難渋しているが、そのほかsiRNAによる抑制実験では、TCF4、ベータカテニンの抑制実験を行い、細胞死を誘導できている。
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| 今後の研究の推進方策 |
ベクター作製においては、もう一度配列などの見直し、あるいは、候補microRNAの変更を考慮したい。
そのほか、APC、AXINのsiRNAなども行い、食道癌においてWntシグナルはどの程度関与するのか、詳細な検討を行いたい。
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